Все госты и снипы онлайн

Более 10000 документов в открытом доступе, абсолютно бесплатно

ГОСТ 10515-75 -

Этот документ был распознан автоматически. В блоке справа Вы можете найти скан-копию. Мы работаем над ручным распознаванием документов, однако это титанический труд и на него уходит очень много времени. Если Вы хотите помочь нам и ускорить обработку документов, Вы всегда можете сделать это, пожертвовав нам небольшую сумму денег.

Файлы для печати:

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы ЙС Т А Н Д А Р ТС О Ю З АС С Р МЕЛКИЙ РОГАТЫЙ СКОТМЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИХЛАМИДИОЗНОГО АБОРТА ОВЕЦ ГОСТ 25381-82 (СТ СЭВ 2699-80)Издание официальное - U O M ( « n et ! ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ М о с к в а •о» л » ..сертификат на трубы стальные
РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССРИСПОЛНИТЕЛИ В. В. Гунемков. Л. М. Шелома. Г. Д. КузнецоваВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССРУТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государст­ венного комитета СССРпо стандартам от11 августа 1982 г.№ 3152Редактор Н. Е. Шестакова Технический редактор Г. А. Макарова Корректор А В. Прокофьева С ааке в иаб. 21 СО.82 Подл в сеч 17.09*3 0.3 а. я. 0.43 уадидд я . 7ир. IOCO0 И ска 3 коп. О рдсаа «Злак Почета» Иадатад»ство стандартен, 123567, M ot*«а. НоаоорссиевсгаА пар., 3 Тил «Могкоаскяй печатник» Москад. Ладин п ар . 6. З а к 930
УД К 636 : 576.8.07 : 006.354 Группе С79 Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Я С Т А Н Д А Р Т С О Ю З А С С Р МЕЛКИМ РОГАТЫЙ с к о т гост Методы лабораторной диагностики хламиднозного аборта оаец 25381-82 Snail cattle. Methods о! laboratory diagnostics oi cblamydions abortionICT СЭВ 2699—80J Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. Nf 3152 срок действия установлен с 01.01. 83 до 01.01. 88 Несоблюдение стандарте преследуется по закону Настоящий стандарт устанавливав] методы лабораторной диагностики хламиднозного аборта овец, вызванного возбудите­ лем из группы хламидий (Chlamydia). Стандарт предназначается для научно-исследовательских уч­ реждений и республиканских ветеринарных лабораторий. Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2699- 80. 1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ 1.1. Для серологических исследований берут сыворотку крови взрослых овей, нс привитых инактивированной или другими вак­ цинами против хламиднозного аборта, полученную без добавле­ ния ингибиторов свертывания. 1.2. Д ля микроскопических исследований, выделения возбуди­ теля и постановки биопробы отбирают пробы патологического материала — плодовые оболочки, влагалищную слизь, ткань лег­ ких, селезенки, желудка и печени плода. 2. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД Сущность метода заключается в установлении титра антител против хламидий в сыворотке крови инфицированных животных с помощью реакции связывания комплемента. И з д а н и е о ф и ц и а л ь н о е Перепечатка воспрещена Издательство стандартов, 1982
Стр. 2 ГОСТ 25381—82 2.1. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы 2.1.1. Для проведения исследования применяют: центрифугу лабораторную с частотой вращения 3000 об/мин; холодильник, обеспечивающий температуру 4—8°С; пробирки бактериологические вместимостью 20 см3 по ГОСТ 10515-75; пробирки центрифужные вместимостью 10 см3: пипетки градуированные вместимостью 1. 2, 5 и 10 см3 по ГОСТ 20292—74; штативы для бактериологических пробирок; баню водяную; микроскоп иммерсионный по ГОСТ 8284—78; термостат или инкубатор; пластины с лунками; сыворотки положительные и отрицательные; антиген специфический для реакции связывания комплемента в рабочем разведении; антиген отрицательный; комплемент; гемолизин; суспензию эритроцитов барана. 2.5%-ную; эмбрионы куриные; кислоту уксусную по ГОСТ 61—75, 1%-ный раствор; фуксин карболовый; готовят разведением 0,3 г фуксина основ­ ного в 10,0 г этиловою спирта (95%-иого): масло иммерсионное по ГОСТ 13739—78; раствор физиологический, pH 7,2—7,4; фуксин основной (фильтрованный); раствор готовят следую­ щим образом: 0,50 г фуксина растворяют в 200 см3 дистиллиро­ ванной воды и фильтруют через бумажный фильтр; кислоту лимонную по ГОСТ 3652—69; раствор готовят сле­ дующим образом: 0,50 г кристаллической лимонной кислоты растворяют в 200 см3 дистиллированной воды. синь метиленовую; раствор готовят следующим образом: 2,0 г порошка метиленовой сини растворяют в 200 см3 дистиллирован­ ной воды. 2.2. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю 2.2.1. Перед постановкой реакции сыворотку крови инакти­ вируют в водяной бане в течение 30 мин при температуре 58— 60°С. Затем готовят двукратные разведения сывороток, начиная с 1 : 5 . 2.2.2. Титрование гемолизина проводят следующим образом: из гемолизина готовят ряд разведений от 1 :1000 до I :10000. В лунки пластины для микротигрования вносят капельной труб­ кой по дне капли (объем одной капли принимают равным 0,025 см3) физиологического раствора поваренной соли, по одной
ГОСТ 25М1—12 Стр 3 капле разведений гемолизина, по одной капле 10%-ного раство­ ра комплемента и по одной капле суспензии эритроцитов барана. Результаты учитывают через 20 мни инкубации при температуре 37°С. В работе используют две единицы гемолизина. 2.2.3. Титрование комплемента проводят следующим образом: 10%-ный раствор комплемента вносят в пробирки по 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 и 0.6 см8. Указанное количество комплемента доводят физиологическим раствором хлористого натрия до объема 1,0 см*. После этого в лунки пластины для микротитрования вносят по две капли физиологического раствора, добавляют по одной капле различных разведений комплемента и по две капли гемолитичес­ кой системы (смеси гемолизина и эритроцитов, инкубированной в течение 20 мин при комнатной температуре). Смесь инкубируют в термостате в течение 20 мин при темпе­ ратуре 37*С и учитывают реакцию. За титр комплемента прини­ мают наибольшее разведение его, которое дает полный гемолиз эритроцитов. В основном опыте используют полторы дозы ком­ племента. 23. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 2.3.1. Сыворотки в разведении 1 :5 вносят но одной капле в две первые лунки двух рядов пластин для мнкротитрования и готовят разведения o r 1:10 до 1 :160 на физиологическом раст­ воре. Для контроля готовят аналогичные разведения положитель­ ной и отрицательной сывороток. В один ряд лунок добавляют по одной капле специфического антигена в рабочем разведении, во второй — по одной капле кон­ трольного антигена или физиологического раствора, затем в каж­ дую лунку добавляют комплемент в рабочем разведении. Пластины выдерживают в холодильнике в течение 18 ч при температуре 4—8аС или в термостате в течение 1 ч при темпе­ ратуре 37°С. Затем в каждую лунку вносят по две капли гемоли­ тической системы и выдерживают в водяной бане в течение 20— 30 мни при температуре 37°С. 2.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 2.4.1. Отсутствие лизиса эритроцитов означает полное (четы­ ре плюса) связывание, т. е. положительную реакцию, а полный их лизис — отсутствие связывания комплемента, т. е. отрицатель­ ную реакцию. Титром исследуемой сыворотки крови считают то наибольшее ее разведение, которое вызывало связывание ком­ племента (три или четыре плюса). Результаты исследований на хламнднозный аборт овец счита­ ют положительными при титре сыворотки 1:10.
Стр. 4 ГОСТ J5381—IT 3. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД Сущность метода заключается в непосредственном обнаруже­ нии хламидии в мазках-отпечатках, приготовленных из патоло­ гического материала. 3.1. А п п а р а т у р а И р е а к т и в ы 3.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру и реактивы, указанные в п. 2.1.1. 3.2. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю 3.2.1. Для обнаружения возбудителя заболевания из отобран­ ного патологического материала готовят мазки-отпечатки. Окрашивание проводит одним из следующих методов: по Циль-Нильсе ну в модификации Стампа; по Маккиавелло. 3.2.1.1. При окрашивании по Цнль-Ннльсену в модификации Стампа мазки сушат на воздухе, фиксируют легким нагреванием над пламенем, окрашивают в течение 10 мин карболовым фукси­ ном Циль-Иильсена, разведенным дистиллированной водой в со­ отношении 1:10, промывают 1%-ной уксусной кислотой в тече­ ние 10—30 с (в зависимости от толщины мазка), после чего окра­ шивают 1%-ным раствором малахитовой зелени в течение 1 — 2 мин. Окрашенные препараты промывают водой и сушзт. 3.2.1.2. При окрашивании по Маккиавелло мазки сушат на воздухе, фиксируют легким нагреванием, окрашивают щелочным фуксином в течение 5 мин, промывают сначала водой, затем рас­ твором лимонной кислоты в течение 15 с. снова промывают во­ дой, окрашивают метиленовой синью э течение 20 с. Окрашен­ ные мазки промывают водой и сушат. 3.3. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 3.3.1. Мазки-отпечатки просматривают под иммерсией свето­ вого микроскопа. 3.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 3.4.1. Наличие в поле зрения мелких округлых образований, окрашенных в малиново-красный цвет, свидетельствует об обна­ ружении хламидий. 4. МЕТОД ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ Сущность метода заключается в обнаружении с помощью флуоресцирующих антител хламидий в мазках-отпечатках и сре­ зах патологического материала. 4.1. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы 4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1. и дополнительно: микроскоп люминисиентный:
ГОСТ 25381—82 Ctp. 5 стекла предметные по ГОСТ 9284—75; стекла покровные по ГОСТ 6672—75; чашки Петрн; пипетки пастеровсхие; масло нефлуоресцирующее; иммуноглобулины против хламидий флуоресцирующие; ацетон по ГОСТ 2603—79, ч.; натрий хлористый по ГОСТ 4233—77; натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 4172—76,х. ч.; натрий фосфорнокислый одноэамещенный по ГОСТ 245—76, х. ч . 4.2. П о д г о т о в к а к и с п ы т а н и ю 4.2.1. Для обнаружения возбудителей заболевания из проб патологического материала готовят мазки-отпечатки или срезы па замораживающем микротоме толщиной 5 мкм. Препараты подсушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне 5 мин и обраба­ тывают флуоресцирующим иммуноглобулином в рабочем разве­ дении. Обработку ведут во влажной камере при температуре 37°С в течение 45 мин. Препараты споласкивают в трех сменах забуферного физио­ логического раствора pH 7,2—7.4 и в дистиллированной воде, а затем подсушивают на воздухе. На препарат наносят нефлуорес­ цирующее масло. Для контроля готовят и обрабатывают флуоресцирующим им­ муноглобулином препараты, приготовленные из органов неэараженных белых мышей. 4.3. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я ' 4.3.К Мазки-отпечатки и срезы просматривают под люминнс- центным микроскопом в сине-фиолетовых лучах. 4.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 4.4.1. Наличие ярко флуоресцирующих зелено-желтым цветом гранул различной величины при тусклом зслсновато-сером свече­ нии клеток свидетельствует об обнаружении хламидий.5 . МЕТОД ПОСТАНОВКИ БИОПРОБЫ Сущность метода заключается в воспроизведении заболева­ ния у белых мышей. 5.1. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы 5.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1. 5.2. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю 5.2.1. Пробу патологического материала — плаценту, легкие, печень и другие органы плода — измельчают на мелкие кусочки и растирают в ступке со стерильным песком. Содержимое разбав-
Стр. 6 ГОСТ 253*1—«2 ляют десятикратным объемом физиологического раствора, содер­ жащим 0.5 мг/см3 стрептомицина. Суспензию центрифугируют с частотой вращения 1000 об/мин в течение 10 м и н / Супернатант ставят на 2 ч в холодильник при температуре 4—8вС. Затем ма­ териал снова центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 30 мин. Полученным супернатантом заражают белых мышей к куриные эмбрионы. 5.3. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 5.3.1. В носовую полость слегка наркотизированных 5—7-не­ дельных белых мышей вносят несколько капель инокулята. Мы­ шей, у которых наблюдаются симптомы болезни (затрудненное дыхание и общая депрессия), забивают и из легких приготовля­ ют мазки-отпечатки для микроскопического исследования, кото­ рое проводится согласно разд. 3, и для иммунофлуоресцентного исследования, проводимого согласно разд. 4. Из той же колонии мышей оставляют в качестве контроль­ ных экземпляров не менее трех мышей. 5.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 5.4.1. В случае появления у инфицированных мышей симпто­ мов болезни или их гибели и обнаружения в мазках-отпечатках хламидий результаты считают положительными. *. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ХЛАМИДИЙ Сущность метода заключается в выделении хламидий на ку­ риных эмбрионах и идентификации их микроскопкрованнем. 6.1. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы 6.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1. 6.2. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 6.2.1. Яйца берут от кур, в рационе которых нет антибиоти­ ков. При помощи инъекционной иглы внодят 0,2 см3 исследуемо­ го материала в желточный мешок 5—7-суточных куриных эмбрио­ нов и инкубируют их при 37°С. Гибель их в течение первых двух сутох считают неспецифической. Погибшие куриные эмбрионы, а также эмбрионы, пережившие 10— 12 дней после заражения, асептически вскрывают и из желточных мешков делают мазкиотпечатки, которые исследуют согласно разд. 3. В случае отри­ цательного результата проводят дополнительно два-три пассажа. 6.3. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 6.3.1. При обнаружении' хламидий в мазках-отпечатках, при­ готовленных из желточных мешков инфицированных павших нлнубГОСТ 25381-82 ртых куриных эмбрионов, результаты исследования на хламнфиозный аборт овец считают положительными.

Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы ЙС Т А Н Д А Р ТС О Ю З АС С Р МЕЛКИЙ РОГАТЫЙ СКОТМЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИХЛАМИДИОЗНОГО АБОРТА ОВЕЦ ГОСТ 25381-82 (СТ СЭВ 2699-80)Издание официальное - U O M ( « n et ! ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ М о с к в а •о» л » ..сертификат на трубы стальные
РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССРИСПОЛНИТЕЛИ В. В. Гунемков. Л. М. Шелома. Г. Д. КузнецоваВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССРУТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государст­ венного комитета СССРпо стандартам от11 августа 1982 г.№ 3152Редактор Н. Е. Шестакова Технический редактор Г. А. Макарова Корректор А В. Прокофьева С ааке в иаб. 21 СО.82 Подл в сеч 17.09*3 0.3 а. я. 0.43 уадидд я . 7ир. IOCO0 И ска 3 коп. О рдсаа «Злак Почета» Иадатад»ство стандартен, 123567, M ot*«а. НоаоорссиевсгаА пар., 3 Тил «Могкоаскяй печатник» Москад. Ладин п ар . 6. З а к 930
УД К 636 : 576.8.07 : 006.354 Группе С79 Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Я С Т А Н Д А Р Т С О Ю З А С С Р МЕЛКИМ РОГАТЫЙ с к о т гост Методы лабораторной диагностики хламиднозного аборта оаец 25381-82 Snail cattle. Methods о! laboratory diagnostics oi cblamydions abortionICT СЭВ 2699—80J Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. Nf 3152 срок действия установлен с 01.01. 83 до 01.01. 88 Несоблюдение стандарте преследуется по закону Настоящий стандарт устанавливав] методы лабораторной диагностики хламиднозного аборта овец, вызванного возбудите­ лем из группы хламидий (Chlamydia). Стандарт предназначается для научно-исследовательских уч­ реждений и республиканских ветеринарных лабораторий. Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 2699- 80. 1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ 1.1. Для серологических исследований берут сыворотку крови взрослых овей, нс привитых инактивированной или другими вак­ цинами против хламиднозного аборта, полученную без добавле­ ния ингибиторов свертывания. 1.2. Д ля микроскопических исследований, выделения возбуди­ теля и постановки биопробы отбирают пробы патологического материала — плодовые оболочки, влагалищную слизь, ткань лег­ ких, селезенки, желудка и печени плода. 2. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД Сущность метода заключается в установлении титра антител против хламидий в сыворотке крови инфицированных животных с помощью реакции связывания комплемента. И з д а н и е о ф и ц и а л ь н о е Перепечатка воспрещена Издательство стандартов, 1982
Стр. 2 ГОСТ 25381—82 2.1. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы 2.1.1. Для проведения исследования применяют: центрифугу лабораторную с частотой вращения 3000 об/мин; холодильник, обеспечивающий температуру 4—8°С; пробирки бактериологические вместимостью 20 см3 по ГОСТ 10515-75; пробирки центрифужные вместимостью 10 см3: пипетки градуированные вместимостью 1. 2, 5 и 10 см3 по ГОСТ 20292—74; штативы для бактериологических пробирок; баню водяную; микроскоп иммерсионный по ГОСТ 8284—78; термостат или инкубатор; пластины с лунками; сыворотки положительные и отрицательные; антиген специфический для реакции связывания комплемента в рабочем разведении; антиген отрицательный; комплемент; гемолизин; суспензию эритроцитов барана. 2.5%-ную; эмбрионы куриные; кислоту уксусную по ГОСТ 61—75, 1%-ный раствор; фуксин карболовый; готовят разведением 0,3 г фуксина основ­ ного в 10,0 г этиловою спирта (95%-иого): масло иммерсионное по ГОСТ 13739—78; раствор физиологический, pH 7,2—7,4; фуксин основной (фильтрованный); раствор готовят следую­ щим образом: 0,50 г фуксина растворяют в 200 см3 дистиллиро­ ванной воды и фильтруют через бумажный фильтр; кислоту лимонную по ГОСТ 3652—69; раствор готовят сле­ дующим образом: 0,50 г кристаллической лимонной кислоты растворяют в 200 см3 дистиллированной воды. синь метиленовую; раствор готовят следующим образом: 2,0 г порошка метиленовой сини растворяют в 200 см3 дистиллирован­ ной воды. 2.2. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю 2.2.1. Перед постановкой реакции сыворотку крови инакти­ вируют в водяной бане в течение 30 мин при температуре 58— 60°С. Затем готовят двукратные разведения сывороток, начиная с 1 : 5 . 2.2.2. Титрование гемолизина проводят следующим образом: из гемолизина готовят ряд разведений от 1 :1000 до I :10000. В лунки пластины для микротигрования вносят капельной труб­ кой по дне капли (объем одной капли принимают равным 0,025 см3) физиологического раствора поваренной соли, по одной
ГОСТ 25М1—12 Стр 3 капле разведений гемолизина, по одной капле 10%-ного раство­ ра комплемента и по одной капле суспензии эритроцитов барана. Результаты учитывают через 20 мни инкубации при температуре 37°С. В работе используют две единицы гемолизина. 2.2.3. Титрование комплемента проводят следующим образом: 10%-ный раствор комплемента вносят в пробирки по 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 и 0.6 см8. Указанное количество комплемента доводят физиологическим раствором хлористого натрия до объема 1,0 см*. После этого в лунки пластины для микротитрования вносят по две капли физиологического раствора, добавляют по одной капле различных разведений комплемента и по две капли гемолитичес­ кой системы (смеси гемолизина и эритроцитов, инкубированной в течение 20 мин при комнатной температуре). Смесь инкубируют в термостате в течение 20 мин при темпе­ ратуре 37*С и учитывают реакцию. За титр комплемента прини­ мают наибольшее разведение его, которое дает полный гемолиз эритроцитов. В основном опыте используют полторы дозы ком­ племента. 23. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 2.3.1. Сыворотки в разведении 1 :5 вносят но одной капле в две первые лунки двух рядов пластин для мнкротитрования и готовят разведения o r 1:10 до 1 :160 на физиологическом раст­ воре. Для контроля готовят аналогичные разведения положитель­ ной и отрицательной сывороток. В один ряд лунок добавляют по одной капле специфического антигена в рабочем разведении, во второй — по одной капле кон­ трольного антигена или физиологического раствора, затем в каж­ дую лунку добавляют комплемент в рабочем разведении. Пластины выдерживают в холодильнике в течение 18 ч при температуре 4—8аС или в термостате в течение 1 ч при темпе­ ратуре 37°С. Затем в каждую лунку вносят по две капли гемоли­ тической системы и выдерживают в водяной бане в течение 20— 30 мни при температуре 37°С. 2.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 2.4.1. Отсутствие лизиса эритроцитов означает полное (четы­ ре плюса) связывание, т. е. положительную реакцию, а полный их лизис — отсутствие связывания комплемента, т. е. отрицатель­ ную реакцию. Титром исследуемой сыворотки крови считают то наибольшее ее разведение, которое вызывало связывание ком­ племента (три или четыре плюса). Результаты исследований на хламнднозный аборт овец счита­ ют положительными при титре сыворотки 1:10.
Стр. 4 ГОСТ J5381—IT 3. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД Сущность метода заключается в непосредственном обнаруже­ нии хламидии в мазках-отпечатках, приготовленных из патоло­ гического материала. 3.1. А п п а р а т у р а И р е а к т и в ы 3.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру и реактивы, указанные в п. 2.1.1. 3.2. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю 3.2.1. Для обнаружения возбудителя заболевания из отобран­ ного патологического материала готовят мазки-отпечатки. Окрашивание проводит одним из следующих методов: по Циль-Нильсе ну в модификации Стампа; по Маккиавелло. 3.2.1.1. При окрашивании по Цнль-Ннльсену в модификации Стампа мазки сушат на воздухе, фиксируют легким нагреванием над пламенем, окрашивают в течение 10 мин карболовым фукси­ ном Циль-Иильсена, разведенным дистиллированной водой в со­ отношении 1:10, промывают 1%-ной уксусной кислотой в тече­ ние 10—30 с (в зависимости от толщины мазка), после чего окра­ шивают 1%-ным раствором малахитовой зелени в течение 1 — 2 мин. Окрашенные препараты промывают водой и сушзт. 3.2.1.2. При окрашивании по Маккиавелло мазки сушат на воздухе, фиксируют легким нагреванием, окрашивают щелочным фуксином в течение 5 мин, промывают сначала водой, затем рас­ твором лимонной кислоты в течение 15 с. снова промывают во­ дой, окрашивают метиленовой синью э течение 20 с. Окрашен­ ные мазки промывают водой и сушат. 3.3. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 3.3.1. Мазки-отпечатки просматривают под иммерсией свето­ вого микроскопа. 3.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 3.4.1. Наличие в поле зрения мелких округлых образований, окрашенных в малиново-красный цвет, свидетельствует об обна­ ружении хламидий. 4. МЕТОД ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ Сущность метода заключается в обнаружении с помощью флуоресцирующих антител хламидий в мазках-отпечатках и сре­ зах патологического материала. 4.1. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы 4.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1. и дополнительно: микроскоп люминисиентный:
ГОСТ 25381—82 Ctp. 5 стекла предметные по ГОСТ 9284—75; стекла покровные по ГОСТ 6672—75; чашки Петрн; пипетки пастеровсхие; масло нефлуоресцирующее; иммуноглобулины против хламидий флуоресцирующие; ацетон по ГОСТ 2603—79, ч.; натрий хлористый по ГОСТ 4233—77; натрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 4172—76,х. ч.; натрий фосфорнокислый одноэамещенный по ГОСТ 245—76, х. ч . 4.2. П о д г о т о в к а к и с п ы т а н и ю 4.2.1. Для обнаружения возбудителей заболевания из проб патологического материала готовят мазки-отпечатки или срезы па замораживающем микротоме толщиной 5 мкм. Препараты подсушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне 5 мин и обраба­ тывают флуоресцирующим иммуноглобулином в рабочем разве­ дении. Обработку ведут во влажной камере при температуре 37°С в течение 45 мин. Препараты споласкивают в трех сменах забуферного физио­ логического раствора pH 7,2—7.4 и в дистиллированной воде, а затем подсушивают на воздухе. На препарат наносят нефлуорес­ цирующее масло. Для контроля готовят и обрабатывают флуоресцирующим им­ муноглобулином препараты, приготовленные из органов неэараженных белых мышей. 4.3. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я ' 4.3.К Мазки-отпечатки и срезы просматривают под люминнс- центным микроскопом в сине-фиолетовых лучах. 4.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 4.4.1. Наличие ярко флуоресцирующих зелено-желтым цветом гранул различной величины при тусклом зслсновато-сером свече­ нии клеток свидетельствует об обнаружении хламидий.5 . МЕТОД ПОСТАНОВКИ БИОПРОБЫ Сущность метода заключается в воспроизведении заболева­ ния у белых мышей. 5.1. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы 5.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1. 5.2. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю 5.2.1. Пробу патологического материала — плаценту, легкие, печень и другие органы плода — измельчают на мелкие кусочки и растирают в ступке со стерильным песком. Содержимое разбав-
Стр. 6 ГОСТ 253*1—«2 ляют десятикратным объемом физиологического раствора, содер­ жащим 0.5 мг/см3 стрептомицина. Суспензию центрифугируют с частотой вращения 1000 об/мин в течение 10 м и н / Супернатант ставят на 2 ч в холодильник при температуре 4—8вС. Затем ма­ териал снова центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 30 мин. Полученным супернатантом заражают белых мышей к куриные эмбрионы. 5.3. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 5.3.1. В носовую полость слегка наркотизированных 5—7-не­ дельных белых мышей вносят несколько капель инокулята. Мы­ шей, у которых наблюдаются симптомы болезни (затрудненное дыхание и общая депрессия), забивают и из легких приготовля­ ют мазки-отпечатки для микроскопического исследования, кото­ рое проводится согласно разд. 3, и для иммунофлуоресцентного исследования, проводимого согласно разд. 4. Из той же колонии мышей оставляют в качестве контроль­ ных экземпляров не менее трех мышей. 5.4. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 5.4.1. В случае появления у инфицированных мышей симпто­ мов болезни или их гибели и обнаружения в мазках-отпечатках хламидий результаты считают положительными. *. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ХЛАМИДИЙ Сущность метода заключается в выделении хламидий на ку­ риных эмбрионах и идентификации их микроскопкрованнем. 6.1. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы 6.1.1. Для проведения исследования применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1. 6.2. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я 6.2.1. Яйца берут от кур, в рационе которых нет антибиоти­ ков. При помощи инъекционной иглы внодят 0,2 см3 исследуемо­ го материала в желточный мешок 5—7-суточных куриных эмбрио­ нов и инкубируют их при 37°С. Гибель их в течение первых двух сутох считают неспецифической. Погибшие куриные эмбрионы, а также эмбрионы, пережившие 10— 12 дней после заражения, асептически вскрывают и из желточных мешков делают мазкиотпечатки, которые исследуют согласно разд. 3. В случае отри­ цательного результата проводят дополнительно два-три пассажа. 6.3. О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в 6.3.1. При обнаружении' хламидий в мазках-отпечатках, при­ готовленных из желточных мешков инфицированных павших нлнубГОСТ 25381-82 ртых куриных эмбрионов, результаты исследования на хламнфиозный аборт овец считают положительными.

Похожие документы