Все госты и снипы онлайн

Более 10000 документов в открытом доступе, абсолютно бесплатно

ГОСТ 25381-82 - Мелкий рогатый скот. Методы лабораторной диагностики хламидиозного аборта овец

Этот документ был распознан автоматически. В блоке справа Вы можете найти скан-копию. Мы работаем над ручным распознаванием документов, однако это титанический труд и на него уходит очень много времени. Если Вы хотите помочь нам и ускорить обработку документов, Вы всегда можете сделать это, пожертвовав нам небольшую сумму денег.

Файлы для печати:

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

МЕЛКИЙ РОГАТЫЙ СКОТ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДМАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗНОГО АБОРТА ОВЕЦ

ГОСТ 25381-82 (СТ СЭВ 2699-80)

Издание официальное

3 коп.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОММТЕТ СССР ПО СТАНДАРТАМ

Москва за 2: . grt i ree ‘ be, Weal, . ` 4 Паш. О-В

Mee


РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР ИСПОЛНИТЕЛИ

8. В. Гунемнов, Л. М. Шалома, Г. Д. Кузнецовг ВНЕСЕН Ммнистерством сельского хозяйства СССР

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государст- венного комитета СССР по стандартам от 11 августа 1982 г. № 3152

Редактор Н. Е. Шестакова Технический редактор Г. 4. Макароес Коорсьтаз А В. Прокофьева

Сааио в маб. 2108.82 Полп в ree 170929 бои ол 743 уч над ол Тыро 10602 3 коп Обрдеха «Знак Почета» Ио стандартак, 22567. Меваи. Норопресиенский пьр. з Тип «Московеный течатанкь Mockss. -Tatkh uep, 6 San Due .


УДК 636: 576.8.07 : 006.354 Группа С79

ГОСУДАРСТВЕННЫЯ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

МЕЛКИИ РОГАТЫЙ СКОТ ГОСТ

Методы лабораторной днагностики

хпомидмозного аборта овец 2 5 3 81 — 8 2

Snall cattle Methods of diagnostics of coiamydiors aborting [СТ СЭВ 2699—8380)

Постановленмем Государственного комитета СССР по стандартам от 11 зегуста 4982 г. № 3152 срои дейстамя установлен

с 04.01. 83 до 01.01. 83

Несоблюдение стаидарте преследуется по закону

Настоящий стапдарт устанавливае: методы лабораторной диагностики хламиднозного аборта овец, вызванного возбудителем из группы хламидий (СШату4з}.

Craraapi UPe le для научно-неследовательских уч- реждений и республиканских ветеринарных лабораторий.

Стандарт полностью соэтвегствует СТ СЭВ 2699- 80.

4. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Для серологическях иссаедованнй берут сыворотку крови взрослых овен, не привитых ннактивированнон нли другими вакцннами протнв хламиднозного аборта, полученную без добавления ингибиторов свертывания.

1.2. Для микроскопических исследований, выделения возбудители OH постановки бнопробы отбирают пробы патологического материала — плодовые оболочки. влагалищную слизь, ткань легких, селезенки, желудка и печеви плода.

2. СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Сущность метода в установлении титра антител против хламидий в сыворотке крози инфипированных животных с помощью реакони связывания комплемента.

Мзданме официальное Перепечазна воспрещена

Издательство стандартов, 1982


Стр. 2 ГОСТ 2538182

2.1. Аппаратура. матерналы и реактивы

2.11. Для проведения неследования применяют:

пентрифугу лабораторную с частотой вращения 3000 об;кин:

холодильннк, обеспечивающий температуру 1—8°С:

пробирки бактернологичсские вместимостью 20 ем? по ГОСТ 10515—75;

пробирхн центрифужные вместимостью 10 смз:

пнпетки вместчабстью 1, 25 и 0 см? по ГОСТ 20292—74:

штативы для бэктериалогических

баню водяную:

микроскоп иммерснонный no TOCT 8284—78:

термостат нли инкубатор;

пластины с лунками:

сыворотки положительные к отрицательные;

антатен специфический для реазпии снязывания комнлемента в рабочем разведении:

антиген отрипательный;

комилемснт;

гемолизнн;

суспензию эритренитов барана. 2.5% -ную.

эмбрноны куриные:

кислоту уксусную по ГОСТ 61—75. 1%-ный раствор;

фуксин карболовый; готовят разведением 0.3 г фукенна основного в 1. г этилового спирта (95° -ного):



масло нммерспонное по ГОСТ 13739—78;

раствор физнологическый, РН 7,2

фуксин основной (фильтрованный): раствор готовят следую- щим образом: 0.50 г фуксина растворяют в 200 см? дистиллированной воды и фильтруют через бумажный фильтр:

кислоту лимонную по ГОСТ 3652—69; раствор готовят следующим образом: 0.50 г кристаллической лимонной кислаты растворяюг в 200 см? дистналированной воды.

синь метиленовую; раствор готовят следуюшим образом: 2.0 г порошка метвленоной сини растворяют в 200 см? дистиллирован- HOM BOLL.

2.2. Полготовка к исследованию

2.2.1. Перед постановкой реакции сыворотку крови ннактивнруют в водяной банп в течение 30 мин при температуре 58— 60°С. Затем готовят двукратные разведения сывороток, начиная e 1:5.

2.2.2 Титрование темолизина проволят следующим образом: нз гемолизина готовят ряд разведений от 1:1000 ло 1: 10000. В лунки пластины для микротитрования вносят капельной трубкой па дне капли Тобъем одной капли принимают равным 0,025 см?) физиологического раствора поваренной соли, по одной


ГОСТ 25381—82 Стр 3

капле разведений гемолизина, по одной капле 10%-ного раствора комплемента н по одной капле суспеизни эритроцитов барана. Результаты учитывают через 20 мин никубации при температуре 37°С. В работе используют две единицы гемолизина.

2.2.3. Тнтрование комплемента проводят следующим образом: 10%-ный раствор комплемента вносят 5х пробирки по 0.1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 и 0.6 см* Указанное количество комплемента доводят физнологическим раствором хлорнстого натрня до объема 1.0 смз. Посль этого в лунки пластины для микротитрования вносят по две каплн физиологического раствора. добавляют по одной капле различных разведений комплемента н по две капли гемолитичес- кой системы (смеси гемолизина и эритроцитов, инкубированной в течение 20 мин при комнатной температуре}.

Смесь ичкубируют в термостате в течение 20 мин при тсыпературе 37°С и учитывают реакцию. За титр комплемента приннмают наибольшее разведение его, которое дает полный гемолиз эритроцитов. В основном опыте используют полторы дазы комплемента.

23 Проведение исследования

2.3.1. Сывороткн в разведении [:5 вносят по одной капле в две первые лунки двух рядов пластин для микротитрования н готовят разведения от 1:10 до 1:160 на физнологическом раст- воре.

ля контроля готовят аналогичные разведения положитель- ной н отрицательной сывороток.

В один ряд лунок добавляют по одной капле специфического антигена в рабочем разведенин, во второй — по одной капле коятрольного антигена нлн физиологического раствора, затем в каждую лунку добавляют комплемент в рабочем разведенни.

Пластины выдерживают в холодильнике в течение 18 ч при температуре 4—8°С или в термостате в течение | ч при температуре 37°С. Затем в каждую лунку вносят по две капин гемолнтической системы и выдерживают в водяной бане в течение 20— 30 мин при температуре 37°С.

2.4. Обработка результатов

2.4.1. Отсутствие лизиса эритроцитов означзет полное {четы- ре нлкюжа) связывание, т. е. положительную резкиию, а полный HX лизис — отсутствие связывания комплемента, т. е. отрицатель- ную реакцию. Титром иссаедуемой сывороткя кровн считают то наибольшее ее разведение, которое вызывало связывание комплемента (три нли четыре плюса},

Результаты исследований ва хламидиозный збофт овец считают положительными прн титре сыворотки |: 10.


Стр. 4 ГОСТ 15384—82

3. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД

Сушиость метода заключается в непосредственном обнаруженин хламидий в мезках отпечатках, приготовленных из патологического материала.

3.1. Апларатура й реактивы

3.1.1. Jak проведения нсследования применяют зппаратуру н реактявы, указанные ви. 21.1.

3.2. Подготовка к исследованию

3.2.1. Для обнаружения возбудителя заболевания из отобранного патологического материала готовят мазки-отпечатки.

Окрашивание проводят одним из следующих метолов:

по Циль-Нильсену в модификации Стампа;

по Маккнавелло.

3.2.1.1. При окрашиваник по Циль-Нильсену в модификации Стампа мазки сушат на воздухе, фиксируют легким нагреваннем над пламенем, окрашивают в течение 10 мин карболовым фуксином Циль-Нильсена, разведенным дистиллированной водой в соотношении 1:10. промывают |1%-ной уксусной кислотой в течение 10—30 с (в зависимости от толщины мазка), после чего окрашивают 14,-ным раствором малахитовой зелени в течение |— 2 мин. Окрашенкые препараты промывают водой и сущат.

3.2.1.2. При окрашивании по Маккиавелло мазки сушат на воздухе, фиксируют легким нагреванием, окрашивают шелочным фуксином в течение 5 мин. промывают сначала водой. затем рас- твором лимонной кислоты в течение 15 с, снова промывают водой, окрашивают метиленовой сннью в течение 20 с. Окрашенные мазки промывают водой н сущат.

3.3. Проведение нсследовання

3.3.1. Мазки-отисчатки просматривают под иммерсией светового микроскопа.

3.4. Обработка результатов

3.4.1. Наличие в поле зрения мелких округлых образований, окрашенных в малиново-красный ивст, свидетельствует об обнаружении хламидий.

4. МЕТОД ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

Сущность метода заключается в обнаружении с помощью флуоресцирующих антител хламидий в мазках-отпечатках и срезах патологического материзлз.



4.1, Аппаратура, материалы и реактивы

4.1.1. Для проведення исследования применяют вппаратуру, материалы н реактивы. указанные в п. 2.1.1. и дополнительно:

микроскоп люминнецентный,


ГОСТ 2538182 Стр. 5

стекла предметные по ГОСТ 9284- 75;

стекла покровные по ГОСТ 6672-75;

чашки Петри;

инпетки ластеровсхие;

масло нефлуоресциирующее;

иммуноглобулины против хламилий флуоресцирующие;

анелон ло ГОСТ 2603--79, ч.:

нагрий хлористый по ГОСТ 4233--77;

нагрий фосфорнокислый двузамещенный по ГОСТ 4172—76, х. ч.:

натрий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 245—76, х. Ч.

4.2. Подготовка к испытанию

4.2.1. Для обнаружения возбудителей заболевания из проб патологического матернала готовят мазки-отпечатки или срезы на зимораживающем микротоме толшиной 5 мкм. Препараты подсушивают на воздухе, фикснруют в ацетоне 5 мин и обрабауывают флуоресцирующим иммуноглобулином в рабочем раззедении. Обработку ведут во влажной камере прин температуре 37°С в течение 45 мин.

Препараты споласкивают в трех сменах забуферного физнологического раствора РН 7,2—1т.4 и в дистиллированной воде, а затем подеуимиваю: на воздухе. На препарат наносят нефлуорес- цирующее масло.

Даля контроля готовят и обрабатывают флуоресцирующим иммуноглобулином препараты, приготовленные из органов незараженных белых мышей.

43. Проведение исследования

4 3.1. Мазки-отлечалки н срезы просматривают под люминнс- центным микроскопом в сине-фиолетовых лучах.

3.4, Обработка результатов

4.4.1, Наличие ярко флуоресцирующих зелена-желтым цветом гранул различнаи величины при тусклом аеленовато-сером свечении клетох свидетельствует об обнаружении хламнлий.

$. МЕТОД ПОСТАНОВКИ БИОПРОБЫ

Сушность метода заключается в воспроизведении заболеваиня у белых мышей.

5.1, Аппаратура, матернэаэлы н резктивы

5 1.1. Для проведения иселедовзния применяют эпиаратуру, матерналы вн реакгины, указанные я п. 2.1.1.

5.2. Подготовка к неследованню

52.1. Пробу патологического материала — плаценту, легкие, печень и другие органы плода — измельчают на мелкие кусочки н растирают в ступке со стернаьным песком. Содержимое разбав-


Стр. 6 ГОСТ 15281—82

ляют десятикратным объемом физнологнческого раствора, содер- жащим 0,5 мг/см? стрептомицина. Суспензию центрифугируют с частотой вращения 1000 об/мин в течение 10 мин. Супернатант ставят на 2 ч в холодильник при температуре 4—8°С. Затем материал снова центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 30 мин. Полученным супернатантом заражают белых мышей к куриные эмбрионы.

5.3. Проведение исследования

5.3.1. носовую полость слегка наркотизированных 5—7-недельных белых мышей вносят несколько капель ннокулята. Мы- шей, у которых наблюдаются симптомы болезни (затрудненное дыхание и общая депрессия), забивают и из легких приготовляют мазки-отпечатки для микроскопического исследования, которое проводится согласно разд. 3, н лля нммунофлуоресцентного исследования, проводимого согласно разд. 4.

Из той же колонин мышей оставляют в качестве контроль- ных экземпляров не менее трех мышей.

5.4. Обработка результатов

5.4.1. В случае появления у инфицированных мышей симптомов болезнн нли их гибели п обнаружения в мазках-отпечатках хламидий результаты считают положительными,

$. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ ХЛАММДИЯ

Сущность метода заключается в выделении хламидий на ку- риных эмбрионах н HACHTHDUKALNK HX микроскопированием.

6.1. Аппаратура, матерналы и реактивы

6.1.1. Для проведения исследования применяют апларатуру, материалы и реактивы, указанные в п. 2.1.1. : °

6.2. Проведение исследования

6.2.1. Яйца берут от кур, в рационе которых нет антибиотнков. При помощи инъекционной иглы внодят 0.2 см? исследуемого матернала в желточный мешок 5—7-суточных курнных эмбрионов и инкубируют их при 37°С. Гибель их в течение первых лвух суток считают неспецифической. Погибшие куриные эмбрионы, а также эмбрионы, пережившие 10—12 дней после заражения, асептически вскрывают и из желточных мешжоа делают мазкиотпечатки, которые исследуют согласно разд. 3. В случае отрипательного результата проводят дополаительно два-три пассажа.

6.3. Обработка результатов

6.3.1. При обнаруженин хламидий в мазках-отпечатках, приготовленных из желточных мешков инфицированных павших иля ‚ убитых курнных эмбрнонов, результаты исследования на хламнднозный аборт овец считают положительными,


Похожие документы