Все госты и снипы онлайн

Более 10000 документов в открытом доступе, абсолютно бесплатно

ГОСТ 33615-2015 - Продукты пищевые, продовольственное сырье. Иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона

Этот документ был распознан автоматически. В блоке справа Вы можете найти скан-копию. Мы работаем над ручным распознаванием документов, однако это титанический труд и на него уходит очень много времени. Если Вы хотите помочь нам и ускорить обработку документов, Вы всегда можете сделать это, пожертвовав нам небольшую сумму денег.

Файлы для печати:

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (МГС) INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (ISC) ГО С Т М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й 33615- С Т А Н Д А Р Т 2015 П Р О Д У К Т Ы П И Щ Е В Ы Е , П Р О Д О В О Л Ь С Т В Е Н Н О Е С Ы Р Ь Е И м м уноф ерм ентны й метод определения остаточного содержания метаболита ф уразолидона Издание оф ициальное Москва Стандартинформ 2016Росстрой
ГОСТ 33615—2015 Предисловие Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стан­ дартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосу­ дарственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены» Сведения о стандарте 1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ») 2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт) 3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. No 81 -П) За принятие проголосовали: К р а т ко е н а и м е н о в а н и е страны К о я стр аны С о кр а щ е н н о е н а и м е н о в а н и е н а ц и о н а л ь н о ю ор га на п о М К (И С О 3 1 6 6 ) 0 0 4 - 9 7 п о М К (И С О 3166 ( 004 - 9 7 п о с т а н д а р т и з а ц и и А р м е н и я A M М и н э к о н о м и к и Р е с п у б л и к и А р м е н и я К и р г и з и я K G К ы р г ы з с т а н д а р т Р о с с и я R U Р о с с т а н д а р т 4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. No 4-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33615—2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г. 5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕИнформация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информацион­ном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправокв ежемесячном инфор­ мационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отменынастоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячноминформационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уве­ домление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользованияна офи­ циальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сетиИнтернет ©Стандартинформ, 2016 В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизве­ ден. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
ГОСТ 33615—2015 Содержание 1 Область применения.......................................................................................................................................... 1 2 Нормативные с с ы л к и ........................................................................................................................................1 3 Термины, определения и сокращения............................................................................................................ 2 4 Сущность метода............................................................................................................................................... 2 5 Метрологические характеристики.................................................................................................................... 3 6 Требования безопасности и условия выполнения изм ерений................................................................... 3 7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы........................................................... 3 8 Подготовка к выполнению измерений............................................................................................................ 4 8.1 Подготовка оборудования..........................................................................................................................4 8.2 Приготовление растворов......................................................................................................................... 4 8.3 Отбор п р о б .................................................................................................................................................. 5 8.4 Подготовка проб.......................................................................................................................................... 6 9 Проведение иммуноферментного анализа....................................................................................................7 9.1 Общие положения........................................................................................................................................7 9.2 Подготовка тест-системы к проведению а н а л и за ................................................................................. 7 9.3 Проведение анализа................................................................................................. 7 10 Обработка результатов измерения............................................................................................................. 7 11 Контроль точности результатов измерения. .............................................................................................9 Приложение А (рекомендуемое) Комплектация тест-системы «Фураэолидон — И Ф А » .........................10 Приложение Б (рекомендуемое) Схема заполнения лунок планшета.......................................................10 Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов измерения...................................... 11 in
ГОСТ 33615—2015 М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й С Т А Н Д А Р Т ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ Иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона Food products, food raw materials. Immunoenzymatlc method for determination of furazolidone metabolite Дата введения — 2017—01—01 1 Область применения Настоящий стандарт распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный порошок, яичный меланж, молоко, рыбу, мед и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона (З-амино-2-оксазолидинона) в диапазоне измерений от 0.7 до 62,5 мкг/кг, для сухого молока — от 7 до 625 мкг/кг. 2 Н ормативные ссы лки В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты: ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классифика­ ция и общие требования безопасности ГОСТ 12.1.019— 79,) Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания ГОСТ 334—73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия ГОСТ 1770— 74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2652— 78 Калия бихромат технический. Технические условия ГОСТ 3118— 77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4204— 77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4328— 77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ ИСО 5725-6—20032' Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике ь В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019—2009 «Система стандартов безопасности труда. Эпектробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты». 2) В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 «Точность (правильность и прецизион­ ность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике». Издание оф ициальное 1
ГОСТ 33615—2015 ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 7269—79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения све­ жести ГОСТ 12026— 76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 19792—2001 Мед натуральный. Технические условия ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры ГОСТ 26809— 86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу ГОСТ 31339—2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 31467—2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям П р и м е ч а н и е — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылоч- ныхстандартовло указателю «Национальныестандарты».составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным е текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (изменен­ ным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, а котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. 3 Термины, определения и сокращения 3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определе­ ниями: 3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и состав­ ных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ. 3.1.2 вспом огательны й раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов. 3.1.3 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа. 3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения: AOZ — З-амино-2-оксазолидинон (метаболит фуразолидона); АГ — антиген; АТ — антитела; ИФА — иммуноферментный анализ; ОП — оптическая плотность; П — относительное поглощение; ТМБ — 3 .3'.5.5'-тетраметилбензидин; ФК — ферментный конъюгат. 4 Сущ ность метода 4.1 Иммуноферментный метод основан на измерении массовой концентрации AOZ в растворах экстрактов исследуемых проб с помощью прямого твердофазного конкурентного ИФА. 4.2 Прямой твердофазный конкурентный ИФА основан на способности маркерного метаболита AOZ и ФК в условиях конкуренции взаимодействовать со специфичными АТ. нанесенными на поверхность лунок планшета. 4.3 Связавшийся с AT AOZ, меченный пероксидазой хрена, выявляют путем измерения интен­ сивности окрашивания продукта реакции окисления 3,3',5.5'-тетраметилбензидина (раствор № 5. см. приложение А) перекисью водорода. Аналитический сигнал (регистрируемое значение ОП). характеризующий степень взаимодей­ ствия АТ с АГ. обратно пропорционален массовой концентрации AOZ в растворе. " В Российской Федерации действует ГОСТ Р 54644—2011 «Мед натуральный. Технические условия». 2
ГОСТ 33615—2015 5 М етрологические характеристики 5.1 Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений массо­ вой концентрации (содержания) AOZ с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к - 2. указанной в таблице 1.Т а б л и ц а 1 — Метрологические характеристики методаЗначениеПоказательПоказательотносительнойповторяемостивоспроизводимостиПределДиапазонAOZрасширенной(относительное(относительноеповторяемостиизмерений(З-амино-2*неопределенности U. среднеквадратичноестандартноег. %содержания,оксазолидинои)при коэффициентеотклонениеотклонение(при Р ■ 0.95.мкг/дм3 (ми/кг)охвата * » 2 ,повторяеыости)воспроизводимости)л * 2}Р = 0.95. %аг. %В мясе, мясе пти­От 0.7 до50162444цы. яйцах, яичном2.0 а ключ.порошке,яичномСе. 2.0 домеланке.рыбе,62.5 включ.3091425молоке, медеОт 7 до 2050162444включ.В сухом молокеСв. 20 до3091425625 включ. 6 Требования безопасности и условия вы полнения измерений 6.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. 6.2 Помещения, в которых проводится анализ и подготовка проб, должны быть оборудованы при­ точно-вытяжной вентиляцией, и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и электробезопасности по ГОСТ 12.1.019. 6.3 К выполнению измерений допускаются лица, владеющие техникой ИФА и изучившие инструк­ ции по применению тест-систем и инструкции по эксплуатации используемых приборов. 6.4 При выполнении измерений соблюдают следующие условия: - температура окружающего в о зд у х а ................................................. от 20 °С до 30 вС: - атмосферное давление. .................................................................... от 84 до 106 кЛа; - напряжение в питающей электросети.............................................. от 200 до 240 В: - частота переменного т о к а ................................................................. от 49 до 51 Гц; - относительная влажность воздуха....................................................от 40% до 80% . 7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы 7.1 При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, аппаратуру, мате­ риалы и посуду: - весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г и пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,05 г; - весы микроаналитические с наибольшим пределом взвешивания 52 г. с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,01 мг; - pH-метр любой марки, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 3 до 10 ед. pH с погрешностью ±0.05 ед. pH; - фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерений ОП от 0 до 3 в комплекте с интерференционными светофильтрами для длин волн 450 и 620 нм; - баню водяную с терморегулятором, позволяющим поддерживать температуру от 40 °С до 100 °С, с отклонением от заданной температуры ±5 °С; - измельчитель-гомогенизатор лабораторный; - калькулятор любого типа с логарифмической функцией; з
ГОСТ 33615—2015 - микроцентрифугу любого типа с частотой вращения 7000 об/мин: - морозильную камеру любого типа, обеспечивающую среднюю температуру в холодильной камере не выше минус 20 °С. - роторный испаритель любого типа или устройство для испарения экстрактов, с термостатируемым нагревательным модулем с системой отдувки растворителей инертным газом; - термостат любого типа, поддерживающий температуру (37 ± 1) °С: - холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном темпе­ ратур от 0 °С до 8 °С; - центрифугу с бакет-ротором и адаптером для пробирок вместимостью 15 см3, частотой вращения не менее 4000 об/мин; - шейкер переворачивающий вертикального вращения 360° в одной плоскости с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин; - шейкер вортексного типа, с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин: - шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий поддержание температуры не менее (95 ♦ 5) °С; - бумагу индикаторную универсальную, pH 0— 12; - бумагу масштабно-координатную по ГОСТ 334, марки Н-1; - бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026: - колбы 1-100 (1000)-2 по ГОСТ 1770: - колбы конические Кн-1-25(50>-24/29 ТС по ГОСТ 25336; - пипетки многоканальные переменной вместимости 0,03—0,3 см3, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1,0 %; - пипетки одноканальные переменной вместимости 0.005— 0,05; 0,1— 1,0; 0,5—5.0 см3 с допус­ тимой относительной погрешностью дозирования по карбинолу и ацетонитрилу не более ±1 %; - пробирки стеклянные типа Л-1-10-0.1 ХС по ГОСТ 25336; - пробирки стеклянные типа «Фалькон» вместимостью 50 см3 с завинчивающимися крышками; - пробирки типа «Эппендорф» вместимостью 1,5 см3: - цилиндры 1(2,3)-10(250. 500)-1 по ГОСТ 1770. 7.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы; - воду дистиллированную по ГОСТ 6709; - калия бихромат по ГОСТ 2652; - кислоту серную по ГОСТ 4204, концентрированную; - кислоту соляную по ГОСТ 3118. концентрированную, плотностью 1.19 г/см3, х. ч.; - метанол с содержанием основного вещества не менее 99 %, х. ч.; - натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч., - натрия фосфат додекагидрат с содержанием основного вещества не менее 98 %; - н-гексан с содержанием основного вещества не менее 98 %, х. ч.; - тест-систему для прямого твердофазного конкурентного ИФА в комплектации (приложение А), которая предназначена для определения AOZ; - этилацетат с содержанием основного вещества не менее 98 %, х. ч. 8 Подготовка к вы полнени ю измерений 8.1 Подготовка оборудования 8.1.1 При подготовке к проведению измерений лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу. 8.1.2 Подготовку и проверку фотометра и pH-метра проводят в соответствии с руководством по эксплуатации приборов. 8.2 Приготовление растворов 8.2.1 Приготовление раствора фосфата натрия с молярной концентрацией 0,3 м оль/дм 3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 11.4 г натрия фосфата додекагидрата, растворяют в 500 см3 дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки водой. Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 1 мес. 4
ГОСТ 33615—2015 8.2.2 Приготовление раствора соляной кислоты с молярной концентрацией 1 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 8.5 см3 концентрированной соляной кислоты, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и тщательно пере­ мешивают. Срок хранения раствора в вытяжном шкафу при комнатной температуре — не более 1 мес. 8.2.3 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,1 м оль/дм 3 В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0.4 г гидроокиси натрия, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес. 8.2.4 Приготовление рабочих градуировочны х растворов AOZ К,— К5 8.2.4.1 Приготовление исходного раствора Kq В пробирку типа «Эппендорф» вносят 0,9 см3 дистиллированной воды. добавляют0,1 см3 реактива No 1 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с. 8.2.4.2 Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ К,— Kj Рабочие градуировочные растворы К,—К5 готовят в стеклянных пробирках типа «Фалькон» согласно таблице 2. Т а б л и ц а 2 — Приготовление рабочих градуировочных растворов Ki—КьНазвание и массоваяВносимый объем, см3концентрацияприготовляемогодистиллированнойисходногорабочегорабочегорабочегораствора AOZподыраствора К0раствора К4раствора К,раствора К.,К* (62.5 мкг/дм3)0.90.1 — — —К4 (12.5 мкг/дм3)0.80.2К , (2.5 МКГ/ДМ*)0.80.2К* (0.5 мкг/дм3)0.80.2Kt (0 мкг/дм3)1.0 Пробирки закрывают крышками и перемешивают на шейкере в течение 20 с. Используют свежеприготовленные растворы. 8.2.5 Приготовление рабочего раствора буфера для пром ы вки В колбу вместимостью 50 см3 вносят 28 см3 дистиллированной воды, добавляют 1.47 см3 реактива № 3 (см. приложение А), перемешивают. Срок хранения раствора при температуре от 2 вС до 8 °С — не более 1 мес. 8.2.6 Приготовление рабочего раствора реакционного буфера В стеклянную пробирку вносят 10 см3 реактива No 4 (см. приложение А) и 0.0065 см3 реактива No 7 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с. Срок хранения раствора при температуре от 2 СС до 8 “С — не более 1 сут. 8.2.7 Приготовление 20 % раствора метанола в рабочем растворе реакционного буфера В колбу вместимостью 25 см3 вносят 8 см3 рабочего раствора реакционного буфера (см. 8.2.6), добавляют 2 см3 метанола, перемешивают. Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 5С — не более 1 сут. 8.2.8 Приготовление рабочего раствора ф ерментного конъю гата В стеклянную пробирку вносят 2,25 см3 реактива № 4 (см. приложение А) и 0.25 см3 реактива No 2 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение Ю с. Используют свежеприготовленный раствор. 8.3 Отбор проб 8.3.1 Отбор проб мяса — по ГОСТ 7269. 8.3.2 Отбор проб мяса птицы — по ГОСТ 31467. 8.3.3 Отбор проб молока — по ГОСТ 26809. 8.3.4 Отбор проб яиц, яичного меланжа и яичного порошка — по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт. 8.3.5 Отбор проб рыбы — по ГОСТ 31339. 8.3.6 Отбор проб меда — по ГОСТ 19792. 5
ГОСТ 33615—2015 8.3.7 Срок хранения отобранных проб при температуре от 2 X до 8 X — 2 сут. При отсутствии возможности исследования проб в течение двух суток они должны быть заморожены при температуре минус 20 X со сроком хранения не более 2 мес. 8.4 Подготовка проб 8.4.1 Мышечную ткань предварительно очищают от жира, грубой соединительной ткани и измельчают на гомогенизаторе. 8.4.2 Яйца отделяют от скорлупы и перемешивают на гомогенизаторе. Меланж, яичный порошок тщательно перемешивают. 8.4.3 При подготовке питьевого молока проводят его обезжиривание с помощью центрифугиро­ вания в течение 15 мин при 4000 об/мин. Верхний слой удаляют. При подготовке сухого молока 1 г пробы перемешивают с 10 см Дистиллированной водыдо полно­ го растворения. Далее проводят обезжиривание, как описано выше. 8.4.4 1.00 г гомогенизированной пробы или 1 см3 обезжиренного молока помещают в стеклянные пробирки типа «Фалькон». Затем обрабатывают испытуемые пробы и градуировочные растворы, приготовленные по 8.2.4.2. как указано на рисунке 1. В каждую пробирку вносят по 5 см5 дистиллированной воды. 0.5 c m j раствора соляной кислоты (см. 8.2.2) и 0.1 см5 реактива № 8 (см. приложение А) и перемешивают на переворачивающем шейкере е течение 10 мин Выдерживают на водяной бане при температуре 50 ®С в течение 3 ч или в термостате при температуре 37 *С в течение 16 ч Пробирки охлаждают при комнатной температуре, добавляют 1,4 см3 раствора фосфата натрия (см. 8.2.1) и тщательно перемешивают на шейкере в течение 30 с I Используя индикаторную бумагу, измеряют pH и доводят его значение до (7,0 ± 0.1) раствором соляной кислоты (см. 8.2.2) или раствором гидроокиси натрия (см. 8.2.3), перемешивают на шейкере 20 с и оставляют для уравновешивания в течение 5 мин I Добавляют 12 c m j этилацетата и перемешивают на переворачивающем шейкере в течение 10 мин 1 Центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин при температуре (23 л 5) °С 1 Переносят 6 см5 верхнего органического слоя в стеклянную пробирку и упаривают досуха в токе азота в системе упаривания при температуре 45 ‘ С. Допускается хранить полученный сухой экстракт, при отсутствии возможности непосредственной дальнейшей обработки, при температуре от 2 *С до 8 *С в течение 24 ч или при температуре минус 20 *С 7 сут I К сухому экстракту добавляют 1 см3 раствора метанола (см. 8.2.7) и тщательно перемешивают на шейкере до полного растворения I Полученный раствор переносят в пробирку типа «Элпендорф». добавляют 0.5 см1 н-гексана и перемешивают на шейкере в течение 30 с. Центрифугируют при 7000 об/мин в течение 10 мин при температуре (23 л 5) вС. Удапяют верхний гексановый слой. Процедуру обезжиривания повторяют еще раз I После удаления гексанового слоя нижний слой используют для проведения ИФА в соответствии с разделом 9 Р и суно к! — Обработка испытуемых проб и градуировочных растворов 6
ГОСТ 33615—2015 9 Проведение иммуноф ерментного анализа 9.1 Общие положения 9.1.1 При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие в один и тот же набор (тест-систему). Разбавление или замена реагентов из набора (тест-системы) другой серии не допускается. 9.1.2 Наборы (тест-системы) следует хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в пределах срока хранения. 9.1.3 Окрашивание раствора субстрата No 5 (см. приложение А) является признаком его порчи и делает невозможным его применение для анализа. 9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа 9.2.1 Перед использованием тест-систему вынимают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин. после чего аккуратно встряхивают каждый флакон. Реактив No 3 (см. приложение А) необходимо прогреть в термостате при температуре 37 °С до полного раство­ рения кристаллов солей и тщательно перемешать. 9.2.2 После использования реагенты тест-системы сразу убирают в холодильник. 9.2.3 На всех стадиях необходимо избегать воздействия прямого солнечного света. 9.2.4 Для каждого реактива и раствора используют отдельные съемные наконечники пипеток переменной вместимости. Внесение растворов в лунки проводят осторожно, не касаясь наконечниками их дна и стенок. 9.2.5 Каждый исследуемый раствор экстрактов испытуемых проб (см. 8.4) и градуировочных рас­ творов (см. 8 2.4.2) анализируют в двух повторностях. П р и м е ч а н и е — Далее приведены расходы реактивов на два стрипаЧ что достаточно для анализа трех исследуемых проб. Для другого числа проб количество используемых стрипов и смешиваемых объемов реагентов изменяют в соответствии с количеством исследуемых проб. 9.3 Проведение анализа 9.3.1 Из планшета извлекают необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы хранят в закрытом фольгированном полиэтиленовом пакете с зип-локом2' при температуре от 2 вС до 8 *С в течение всего срока годности тест-системы. 9.3.2 В лунки планшета вносят по 0.05 см3 экстрактов рабочих градуировочных растворов К,— Ks (см. 8.2.4.2) и растворов испытуемых проб. Каждый раствор вносят в двойной повторности (лунки-дубли). Внесение растворов проводят согласно приложению Б. Далее в каждую лунку вносят по 0.05 см3 рабочего раствора ферментного конъюгата (см. 8.2.8). Стрипы заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре от 2 5С до 8 °С в течение 1 ч, после чего содержимое лунок сливают. 9.3.3 В лунки планшета вносят по 0.2 см3 раствора буфера для промывки (см. 8.2.5). оставляют на 1—2 мин и сливают. Процедуру промывки повторяют еще три раза. Остатки жидкости интенсивно стряхивают на чистую фильтровальную бумагу. 9.3.4 В лунки планшета вносят по 0.1 см3 раствора N& 5 (см. приложение А) и инкубируют в тер­ мостате при температуре 37 °С в течение 10 мин. Добавляют по 0.1 см3 раствора N9 6 (см. приложение А), аккуратно перемешивают легким постукиванием по ребру планшета. Помещают планшет в верти­ кальный фотометр и измеряют значения ОП при длине волны 450 нм. 10 Обработка результатов измерения 10.1 По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность значений ОП для них в процентах от среднего не должна превышать 10. Стрип — полоска из восьми лунок. 21 Зип-лок — замок, обеспечивающий герметизацию пакета. 7
ГОСТ 33615—2015 Связывание АТ (или относительное поглощение П. %. рассчитывают по формуле П = °1 к .1 0 0 , (Ч) ОП, где ОП„ — среднее значение ОП. изморенной в лунках с экстрактами градуировочных растворов Kj—К; (см. 8.2.4) и с растворами экстрактов испытуемых проб; ОПк — среднее значение ОП. измеренной в лунках с нулевым стандартом (экстрактом градуировоч­ ного раствора К, (см. 8.2.4); По значениям процентов связывания. вычисленным для градуировочных растворов с соответству­ ющими известными значениями массовой концентрации AOZ. мкг/дм3, строят градуировочный график в полулогарифмической системе координат. 10.2 Для построения градуировочного графика используют масштабно-координатную бумагу. На ось абсцисс наносят значения логарифмов концентраций AOZ в градуировочных растворах К2—К5 (см. 8.2.4.2). По оси ординат откладывают значения процентов связывания, рассчитанные для массовых концентраций по формуле (1). Градуировочный график строят с использованием линейной зависимости. 10.3 С помощью градуировочного графика по значению процента связывания, полученного для растворов экстрактов испытуемых проб, находят логарифмы массовой концентрации в них AOZ. С помощью калькулятора вычисляют его обратное значение (антилогарифм), соответствующее мас­ совой концентрации AOZ в растворе экстракта. 10.4 Массовую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе С. мкг/дм3 (мкг/кг), рассчи­ тывают по формулеС - с - К , (2) где с — массовая концентрация AOZ в рабочем растворе экстракта испытуемой пробы, определяемая по градуировочному графику, мкг/дм3;К — коэффициент пересчета мкг/дм3 в мкг/кг в экстракте испытуемой пробы, учитывающий ее разве­ дение; для сухого молока равен 10. для остальных проб — единице. Образец записи результатов измерений приведен в приложении В. За окончательный результат принимают среднеарифметическое двух измерений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости |С> - Сг| £ 0.01 • Сер • /о т, (3) где С, и С2 — результаты определений массовой концентрации (содержания) AOZ. полученные в усло­ виях повторяемости, мкг/дм3 (мкг/кг); Сср — среднеарифметическое результатов двух определений массовой концентрации AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг); готн — предел повторяемости (%). приведенный в таблице 1. Результаты измерений массовой концентрации (содержания) AOZ, мкг/дм3 (мкг/кг). округляют до первого знака после запятой. 10.5 Допускается использование программного обеспечения, позволяющего определять мас­ совую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе по средним значениям ОП. измеренным в лунках с экстрактами градуировочных растворов и испытуемых проб. С помощью компьютерной системы обработки данных строят градуировочную зависимость оптической плотности раствора от массовой концентрации AOZ и аппроксимируют линейной функцией. Градуировочная зависимость считается приемлемой, если рассчитанное программным обеспе­ чением значение коэффициента корреляции г*£0.98. За результат измерений принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости 2 - |С , - С » |- ю о ^ (4) ( С , * С 2) где С,, С2 — результаты параллельных определений массовой концентрации AOZ. мкг/дм3; г — значение предела повторяемости для разных диапазонов измерения (см. таблицу 1). 8
ГОСТ 33615—2015 Результат определения массовой концентрации (содержания) AOZ в анализируемой пробе представляют в виде С i 0.01 ■ U, (5) где С — массовая концентрация (содержание) AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг):U — значение относительной расширенной неопределенности при коэффициенте охвата к = 2. % (см. таблицу 1). 11 Контроль точности результатов измерения Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходи­ мости) и воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5). 9
ГОСТ 33615—2015 П риложение А (реком ендуем ое) Комплектация тест-системы 1' «Фуразолидон — ИФА» В комплектацию тест-системы входят: Планшет 96-луночный полистироловый стрипованный для иммунологических исследований, с иммобилизо­ ванными антителами. Пакет полиэтиленовый фолыированный с зип-локом; Пленка полиэтиленовая самоклеящаясядля заклеивания планшетов. Растворы: № 1 — AOZ — раствор с известным содержанием AOZ (6.25 мкг/см3); Мг 2 — ФК — конъюгат AOZ с пероксидазой хрена; № 3 — раствор фосфатного буфера для промывки (20-кратный концентрат), pH (7,0— 7,4); № 4 — реакционный буферный раствор с добавлением бычьего сывороточного альбумина, pH (7.0— 7.4), стерильный: № 5 — раствор субстрата на основе 3,3',5,5'-ТМБ сдобавлением перекиси водорода; Мг 6 — стоп-реагент — раствор серной кислоты молярной концентрации 0.5 моль/дм-3; № 7 — раствор натрия ацетата молярной концентрации 3.0 моль/дм3; № 8 — раствор 2-нитробензальдегида в ДМСО с молярной концентрацией 0,01 моль/дм3. " Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настояще­ го стандарта. Приложение Б (реком ендуем ое) Схема заполнения лунок планшета Внесение реагентов следует проводить согласно следующей схеме. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 А К, К, Мг 4 Ns 4 Ns 12 Мг 12 Ns 20 Мг 20 Ns 28 Ns 28 Ns 36 Мг 36 В к* к2 № 5 N? 5 Ns 13 Ns 13 Ns 21 Мг 21 Ns 29 Ns 29 Ns 37 Мг 37 С к 3 К3 Ms 6 Ns 6 Ns 14 Мг 14 Мг 22 Мг 22 Ns 30 Ns 30 Ns 38 Мг 38 D к< к. Мг 7 N? 7 Ns 15 Мг 15 Мг 23 Мг 23 Ns 31 Ns 31 Ns 39 Мг 39 Е Кь Ms 8 Ns 8 Ns 16 Мг 16 Мг 24 Мг 24 Ns 32 Ns 32 Ns 40 Мг 40 F N5 1 Мг 1 Мг 9 N? 9 Ns 17 Мг 17 Мг 25 Мг 25 Ns 33 Ns 33 Ns 41 Мг 41 G Ns 2 № 2 № 10 Ns 10 Ns 18 Мг 18 Мг 26 Мг 26 Ns 34 Ns 34 Ns 42 Мг 42 Н № 3 № 3 Ns 11 № 11 Ns 19 Мг 19 Мг 27 Мг 27 Ns 35 Ns 35 Ns 43 Мг 43 10
ГОСТ 33615—2015 П рилож ение В (реком ендуем ое) Таблица для записи результатов измерения Т а б л и ц а В.1Массовая концентрацияЗначение ОП(содержание) AOZМаркировка£ 2 : . 100. %вариантаОП, 1 Н}| С о исследуемойв экстракте с.по лункамсреднеепробе С.ыкг/ды5 м к г . ' д м !(мкг/кг) к,0 к,к*0.30.5 К* к,0.42.5Ks К ч 1,112.5 К чк* 1 .862.5к*№ 1№ 1N9 ...N9 ...№ 42№ 42№ 43№ 43 11
ГОСТ 33615—2015 УДК 664:615.28:006.354 МКС 67.050 67.100 67.120 Ключевые слова: продукты пищевые, продовольственное сырье, метаболит фуразолидона. остаточное содержание, иммумоферментный метод, прецизионность метода, тест-система, антиген, антитела, оптическая плотность, ферментный конъюгат Р е д а кто р К .В .Д у д к о Т е х н и ч е с ки й р е д а кто р В .Ю . Ф о т и е а а К о р р е кто р М .8 . Б уйная К о м п ь ю т е р н а я в е р с тка И .Л . Н а л е й к и н о й С д ан о в набор 19.02 2 0 1 6 . П о д п и с а н о в п е ча ть 2 5 .0 3 .2 0 1 6 . Ф о р м а т 8 0 * 8 4 Г а р н и тур а А р иал У ел. п е ч. п . 1,86. У ч .-и зд . п. 1.40. Т и р а ж 35 экэ. З а к. 857. И з д а н о и о т п е ч а т а н о в о Ф Г У П « С Т А Н Д А Р Т И Н Ф О Р М » , 123995 М о сква . Г р а н а тн ы й п е р .. 4w w w .90stin fo .ruin fo @ 90stin fo .ruГОСТ 33615-2015

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (МГС) INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (ISC) ГО С Т М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й 33615- С Т А Н Д А Р Т 2015 П Р О Д У К Т Ы П И Щ Е В Ы Е , П Р О Д О В О Л Ь С Т В Е Н Н О Е С Ы Р Ь Е И м м уноф ерм ентны й метод определения остаточного содержания метаболита ф уразолидона Издание оф ициальное Москва Стандартинформ 2016Росстрой
ГОСТ 33615—2015 Предисловие Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стан­ дартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосу­ дарственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены» Сведения о стандарте 1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ») 2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт) 3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. No 81 -П) За принятие проголосовали: К р а т ко е н а и м е н о в а н и е страны К о я стр аны С о кр а щ е н н о е н а и м е н о в а н и е н а ц и о н а л ь н о ю ор га на п о М К (И С О 3 1 6 6 ) 0 0 4 - 9 7 п о М К (И С О 3166 ( 004 - 9 7 п о с т а н д а р т и з а ц и и А р м е н и я A M М и н э к о н о м и к и Р е с п у б л и к и А р м е н и я К и р г и з и я K G К ы р г ы з с т а н д а р т Р о с с и я R U Р о с с т а н д а р т 4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 18 января 2016 г. No 4-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33615—2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г. 5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕИнформация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информацион­ном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправокв ежемесячном инфор­ мационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отменынастоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячноминформационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уве­ домление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользованияна офи­ циальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сетиИнтернет ©Стандартинформ, 2016 В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизве­ ден. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
ГОСТ 33615—2015 Содержание 1 Область применения.......................................................................................................................................... 1 2 Нормативные с с ы л к и ........................................................................................................................................1 3 Термины, определения и сокращения............................................................................................................ 2 4 Сущность метода............................................................................................................................................... 2 5 Метрологические характеристики.................................................................................................................... 3 6 Требования безопасности и условия выполнения изм ерений................................................................... 3 7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы........................................................... 3 8 Подготовка к выполнению измерений............................................................................................................ 4 8.1 Подготовка оборудования..........................................................................................................................4 8.2 Приготовление растворов......................................................................................................................... 4 8.3 Отбор п р о б .................................................................................................................................................. 5 8.4 Подготовка проб.......................................................................................................................................... 6 9 Проведение иммуноферментного анализа....................................................................................................7 9.1 Общие положения........................................................................................................................................7 9.2 Подготовка тест-системы к проведению а н а л и за ................................................................................. 7 9.3 Проведение анализа................................................................................................. 7 10 Обработка результатов измерения............................................................................................................. 7 11 Контроль точности результатов измерения. .............................................................................................9 Приложение А (рекомендуемое) Комплектация тест-системы «Фураэолидон — И Ф А » .........................10 Приложение Б (рекомендуемое) Схема заполнения лунок планшета.......................................................10 Приложение В (рекомендуемое) Таблица для записи результатов измерения...................................... 11 in
ГОСТ 33615—2015 М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й С Т А Н Д А Р Т ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОЕ СЫРЬЕ Иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона Food products, food raw materials. Immunoenzymatlc method for determination of furazolidone metabolite Дата введения — 2017—01—01 1 Область применения Настоящий стандарт распространяется на мясо, мясо птицы, яйца, яичный порошок, яичный меланж, молоко, рыбу, мед и устанавливает иммуноферментный метод определения остаточного содержания метаболита фуразолидона (З-амино-2-оксазолидинона) в диапазоне измерений от 0.7 до 62,5 мкг/кг, для сухого молока — от 7 до 625 мкг/кг. 2 Н ормативные ссы лки В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты: ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классифика­ ция и общие требования безопасности ГОСТ 12.1.019— 79,) Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты ГОСТ OIML R 76-1—2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания ГОСТ 334—73 Бумага масштабно-координатная. Технические условия ГОСТ 1770— 74 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия ГОСТ 2652— 78 Калия бихромат технический. Технические условия ГОСТ 3118— 77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия ГОСТ 4204— 77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия ГОСТ 4328— 77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия ГОСТ ИСО 5725-6—20032' Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике ь В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019—2009 «Система стандартов безопасности труда. Эпектробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты». 2) В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6—2002 «Точность (правильность и прецизион­ ность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике». Издание оф ициальное 1
ГОСТ 33615—2015 ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 7269—79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения све­ жести ГОСТ 12026— 76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 19792—2001 Мед натуральный. Технические условия ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры ГОСТ 26809— 86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу ГОСТ 31339—2006 Рыба, нерыбные объекты и продукция из них. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 31467—2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям П р и м е ч а н и е — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылоч- ныхстандартовло указателю «Национальныестандарты».составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным е текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (изменен­ ным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, а котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку. 3 Термины, определения и сокращения 3.1 В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определе­ ниями: 3.1.1 тест-система: Набор (комплект) специально подобранных реагентов (реактивов) и состав­ ных частей, предназначенный для определения одного или нескольких конкретных веществ. 3.1.2 вспом огательны й раствор: Раствор, приготовляемый заблаговременно и необходимый для приготовления других типов растворов. 3.1.3 рабочий раствор: Раствор одного или нескольких реактивов, приготовляемый непосредственно перед использованием и необходимый для выполнения процедуры анализа. 3.2 В настоящем стандарте применены следующие сокращения: AOZ — З-амино-2-оксазолидинон (метаболит фуразолидона); АГ — антиген; АТ — антитела; ИФА — иммуноферментный анализ; ОП — оптическая плотность; П — относительное поглощение; ТМБ — 3 .3'.5.5'-тетраметилбензидин; ФК — ферментный конъюгат. 4 Сущ ность метода 4.1 Иммуноферментный метод основан на измерении массовой концентрации AOZ в растворах экстрактов исследуемых проб с помощью прямого твердофазного конкурентного ИФА. 4.2 Прямой твердофазный конкурентный ИФА основан на способности маркерного метаболита AOZ и ФК в условиях конкуренции взаимодействовать со специфичными АТ. нанесенными на поверхность лунок планшета. 4.3 Связавшийся с AT AOZ, меченный пероксидазой хрена, выявляют путем измерения интен­ сивности окрашивания продукта реакции окисления 3,3',5.5'-тетраметилбензидина (раствор № 5. см. приложение А) перекисью водорода. Аналитический сигнал (регистрируемое значение ОП). характеризующий степень взаимодей­ ствия АТ с АГ. обратно пропорционален массовой концентрации AOZ в растворе. " В Российской Федерации действует ГОСТ Р 54644—2011 «Мед натуральный. Технические условия». 2
ГОСТ 33615—2015 5 М етрологические характеристики 5.1 Установленный в настоящем стандарте метод обеспечивает выполнение измерений массо­ вой концентрации (содержания) AOZ с расширенной неопределенностью результатов аналитических измерений при коэффициенте охвата к - 2. указанной в таблице 1.Т а б л и ц а 1 — Метрологические характеристики методаЗначениеПоказательПоказательотносительнойповторяемостивоспроизводимостиПределДиапазонAOZрасширенной(относительное(относительноеповторяемостиизмерений(З-амино-2*неопределенности U. среднеквадратичноестандартноег. %содержания,оксазолидинои)при коэффициентеотклонениеотклонение(при Р ■ 0.95.мкг/дм3 (ми/кг)охвата * » 2 ,повторяеыости)воспроизводимости)л * 2}Р = 0.95. %аг. %В мясе, мясе пти­От 0.7 до50162444цы. яйцах, яичном2.0 а ключ.порошке,яичномСе. 2.0 домеланке.рыбе,62.5 включ.3091425молоке, медеОт 7 до 2050162444включ.В сухом молокеСв. 20 до3091425625 включ. 6 Требования безопасности и условия вы полнения измерений 6.1 При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007. 6.2 Помещения, в которых проводится анализ и подготовка проб, должны быть оборудованы при­ точно-вытяжной вентиляцией, и соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и электробезопасности по ГОСТ 12.1.019. 6.3 К выполнению измерений допускаются лица, владеющие техникой ИФА и изучившие инструк­ ции по применению тест-систем и инструкции по эксплуатации используемых приборов. 6.4 При выполнении измерений соблюдают следующие условия: - температура окружающего в о зд у х а ................................................. от 20 °С до 30 вС: - атмосферное давление. .................................................................... от 84 до 106 кЛа; - напряжение в питающей электросети.............................................. от 200 до 240 В: - частота переменного т о к а ................................................................. от 49 до 51 Гц; - относительная влажность воздуха....................................................от 40% до 80% . 7 Средства измерений, аппаратура, материалы, посуда и реактивы 7.1 При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, аппаратуру, мате­ риалы и посуду: - весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с наибольшим пределом взвешивания не более 150 г и пределом допускаемой абсолютной погрешности ±0,05 г; - весы микроаналитические с наибольшим пределом взвешивания 52 г. с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ±0,01 мг; - pH-метр любой марки, позволяющий проводить измерения в диапазоне от 3 до 10 ед. pH с погрешностью ±0.05 ед. pH; - фотометр вертикального типа фотометрирования с диапазоном измерений ОП от 0 до 3 в комплекте с интерференционными светофильтрами для длин волн 450 и 620 нм; - баню водяную с терморегулятором, позволяющим поддерживать температуру от 40 °С до 100 °С, с отклонением от заданной температуры ±5 °С; - измельчитель-гомогенизатор лабораторный; - калькулятор любого типа с логарифмической функцией; з
ГОСТ 33615—2015 - микроцентрифугу любого типа с частотой вращения 7000 об/мин: - морозильную камеру любого типа, обеспечивающую среднюю температуру в холодильной камере не выше минус 20 °С. - роторный испаритель любого типа или устройство для испарения экстрактов, с термостатируемым нагревательным модулем с системой отдувки растворителей инертным газом; - термостат любого типа, поддерживающий температуру (37 ± 1) °С: - холодильник бытовой с цифровым контроллером температуры и рабочим диапазоном темпе­ ратур от 0 °С до 8 °С; - центрифугу с бакет-ротором и адаптером для пробирок вместимостью 15 см3, частотой вращения не менее 4000 об/мин; - шейкер переворачивающий вертикального вращения 360° в одной плоскости с адаптером для пробирок и диапазоном скорости от 20 до 100 об/мин; - шейкер вортексного типа, с вставкой для одной пробирки и диапазоном скорости от 150 до 2500 об/мин: - шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий поддержание температуры не менее (95 ♦ 5) °С; - бумагу индикаторную универсальную, pH 0— 12; - бумагу масштабно-координатную по ГОСТ 334, марки Н-1; - бумагу фильтровальную лабораторную по ГОСТ 12026: - колбы 1-100 (1000)-2 по ГОСТ 1770: - колбы конические Кн-1-25(50>-24/29 ТС по ГОСТ 25336; - пипетки многоканальные переменной вместимости 0,03—0,3 см3, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более ±1,0 %; - пипетки одноканальные переменной вместимости 0.005— 0,05; 0,1— 1,0; 0,5—5.0 см3 с допус­ тимой относительной погрешностью дозирования по карбинолу и ацетонитрилу не более ±1 %; - пробирки стеклянные типа Л-1-10-0.1 ХС по ГОСТ 25336; - пробирки стеклянные типа «Фалькон» вместимостью 50 см3 с завинчивающимися крышками; - пробирки типа «Эппендорф» вместимостью 1,5 см3: - цилиндры 1(2,3)-10(250. 500)-1 по ГОСТ 1770. 7.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы; - воду дистиллированную по ГОСТ 6709; - калия бихромат по ГОСТ 2652; - кислоту серную по ГОСТ 4204, концентрированную; - кислоту соляную по ГОСТ 3118. концентрированную, плотностью 1.19 г/см3, х. ч.; - метанол с содержанием основного вещества не менее 99 %, х. ч.; - натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч., - натрия фосфат додекагидрат с содержанием основного вещества не менее 98 %; - н-гексан с содержанием основного вещества не менее 98 %, х. ч.; - тест-систему для прямого твердофазного конкурентного ИФА в комплектации (приложение А), которая предназначена для определения AOZ; - этилацетат с содержанием основного вещества не менее 98 %, х. ч. 8 Подготовка к вы полнени ю измерений 8.1 Подготовка оборудования 8.1.1 При подготовке к проведению измерений лабораторную стеклянную посуду моют смесью водного раствора бихромата калия с концентрированной серной кислотой, многократно промывают водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают в сушильном шкафу. 8.1.2 Подготовку и проверку фотометра и pH-метра проводят в соответствии с руководством по эксплуатации приборов. 8.2 Приготовление растворов 8.2.1 Приготовление раствора фосфата натрия с молярной концентрацией 0,3 м оль/дм 3 В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 11.4 г натрия фосфата додекагидрата, растворяют в 500 см3 дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки водой. Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 °С — не более 1 мес. 4
ГОСТ 33615—2015 8.2.2 Приготовление раствора соляной кислоты с молярной концентрацией 1 моль/дм3 В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 8.5 см3 концентрированной соляной кислоты, доводят объем раствора дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и тщательно пере­ мешивают. Срок хранения раствора в вытяжном шкафу при комнатной температуре — не более 1 мес. 8.2.3 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрацией 0,1 м оль/дм 3 В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0.4 г гидроокиси натрия, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре — не более 1 мес. 8.2.4 Приготовление рабочих градуировочны х растворов AOZ К,— К5 8.2.4.1 Приготовление исходного раствора Kq В пробирку типа «Эппендорф» вносят 0,9 см3 дистиллированной воды. добавляют0,1 см3 реактива No 1 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с. 8.2.4.2 Приготовление рабочих градуировочных растворов AOZ К,— Kj Рабочие градуировочные растворы К,—К5 готовят в стеклянных пробирках типа «Фалькон» согласно таблице 2. Т а б л и ц а 2 — Приготовление рабочих градуировочных растворов Ki—КьНазвание и массоваяВносимый объем, см3концентрацияприготовляемогодистиллированнойисходногорабочегорабочегорабочегораствора AOZподыраствора К0раствора К4раствора К,раствора К.,К* (62.5 мкг/дм3)0.90.1 — — —К4 (12.5 мкг/дм3)0.80.2К , (2.5 МКГ/ДМ*)0.80.2К* (0.5 мкг/дм3)0.80.2Kt (0 мкг/дм3)1.0 Пробирки закрывают крышками и перемешивают на шейкере в течение 20 с. Используют свежеприготовленные растворы. 8.2.5 Приготовление рабочего раствора буфера для пром ы вки В колбу вместимостью 50 см3 вносят 28 см3 дистиллированной воды, добавляют 1.47 см3 реактива № 3 (см. приложение А), перемешивают. Срок хранения раствора при температуре от 2 вС до 8 °С — не более 1 мес. 8.2.6 Приготовление рабочего раствора реакционного буфера В стеклянную пробирку вносят 10 см3 реактива No 4 (см. приложение А) и 0.0065 см3 реактива No 7 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение 30 с. Срок хранения раствора при температуре от 2 СС до 8 “С — не более 1 сут. 8.2.7 Приготовление 20 % раствора метанола в рабочем растворе реакционного буфера В колбу вместимостью 25 см3 вносят 8 см3 рабочего раствора реакционного буфера (см. 8.2.6), добавляют 2 см3 метанола, перемешивают. Срок хранения раствора при температуре от 2 °С до 8 5С — не более 1 сут. 8.2.8 Приготовление рабочего раствора ф ерментного конъю гата В стеклянную пробирку вносят 2,25 см3 реактива № 4 (см. приложение А) и 0.25 см3 реактива No 2 (см. приложение А), перемешивают на шейкере в течение Ю с. Используют свежеприготовленный раствор. 8.3 Отбор проб 8.3.1 Отбор проб мяса — по ГОСТ 7269. 8.3.2 Отбор проб мяса птицы — по ГОСТ 31467. 8.3.3 Отбор проб молока — по ГОСТ 26809. 8.3.4 Отбор проб яиц, яичного меланжа и яичного порошка — по нормативным документам, действующим на территории государства, принявшего стандарт. 8.3.5 Отбор проб рыбы — по ГОСТ 31339. 8.3.6 Отбор проб меда — по ГОСТ 19792. 5
ГОСТ 33615—2015 8.3.7 Срок хранения отобранных проб при температуре от 2 X до 8 X — 2 сут. При отсутствии возможности исследования проб в течение двух суток они должны быть заморожены при температуре минус 20 X со сроком хранения не более 2 мес. 8.4 Подготовка проб 8.4.1 Мышечную ткань предварительно очищают от жира, грубой соединительной ткани и измельчают на гомогенизаторе. 8.4.2 Яйца отделяют от скорлупы и перемешивают на гомогенизаторе. Меланж, яичный порошок тщательно перемешивают. 8.4.3 При подготовке питьевого молока проводят его обезжиривание с помощью центрифугиро­ вания в течение 15 мин при 4000 об/мин. Верхний слой удаляют. При подготовке сухого молока 1 г пробы перемешивают с 10 см Дистиллированной водыдо полно­ го растворения. Далее проводят обезжиривание, как описано выше. 8.4.4 1.00 г гомогенизированной пробы или 1 см3 обезжиренного молока помещают в стеклянные пробирки типа «Фалькон». Затем обрабатывают испытуемые пробы и градуировочные растворы, приготовленные по 8.2.4.2. как указано на рисунке 1. В каждую пробирку вносят по 5 см5 дистиллированной воды. 0.5 c m j раствора соляной кислоты (см. 8.2.2) и 0.1 см5 реактива № 8 (см. приложение А) и перемешивают на переворачивающем шейкере е течение 10 мин Выдерживают на водяной бане при температуре 50 ®С в течение 3 ч или в термостате при температуре 37 *С в течение 16 ч Пробирки охлаждают при комнатной температуре, добавляют 1,4 см3 раствора фосфата натрия (см. 8.2.1) и тщательно перемешивают на шейкере в течение 30 с I Используя индикаторную бумагу, измеряют pH и доводят его значение до (7,0 ± 0.1) раствором соляной кислоты (см. 8.2.2) или раствором гидроокиси натрия (см. 8.2.3), перемешивают на шейкере 20 с и оставляют для уравновешивания в течение 5 мин I Добавляют 12 c m j этилацетата и перемешивают на переворачивающем шейкере в течение 10 мин 1 Центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 мин при температуре (23 л 5) °С 1 Переносят 6 см5 верхнего органического слоя в стеклянную пробирку и упаривают досуха в токе азота в системе упаривания при температуре 45 ‘ С. Допускается хранить полученный сухой экстракт, при отсутствии возможности непосредственной дальнейшей обработки, при температуре от 2 *С до 8 *С в течение 24 ч или при температуре минус 20 *С 7 сут I К сухому экстракту добавляют 1 см3 раствора метанола (см. 8.2.7) и тщательно перемешивают на шейкере до полного растворения I Полученный раствор переносят в пробирку типа «Элпендорф». добавляют 0.5 см1 н-гексана и перемешивают на шейкере в течение 30 с. Центрифугируют при 7000 об/мин в течение 10 мин при температуре (23 л 5) вС. Удапяют верхний гексановый слой. Процедуру обезжиривания повторяют еще раз I После удаления гексанового слоя нижний слой используют для проведения ИФА в соответствии с разделом 9 Р и суно к! — Обработка испытуемых проб и градуировочных растворов 6
ГОСТ 33615—2015 9 Проведение иммуноф ерментного анализа 9.1 Общие положения 9.1.1 При проведении испытаний следует использовать реагенты и компоненты, входящие в один и тот же набор (тест-систему). Разбавление или замена реагентов из набора (тест-системы) другой серии не допускается. 9.1.2 Наборы (тест-системы) следует хранить при температуре от 2 °С до 8 °С в пределах срока хранения. 9.1.3 Окрашивание раствора субстрата No 5 (см. приложение А) является признаком его порчи и делает невозможным его применение для анализа. 9.2 Подготовка тест-системы к проведению анализа 9.2.1 Перед использованием тест-систему вынимают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре не менее 30 мин. после чего аккуратно встряхивают каждый флакон. Реактив No 3 (см. приложение А) необходимо прогреть в термостате при температуре 37 °С до полного раство­ рения кристаллов солей и тщательно перемешать. 9.2.2 После использования реагенты тест-системы сразу убирают в холодильник. 9.2.3 На всех стадиях необходимо избегать воздействия прямого солнечного света. 9.2.4 Для каждого реактива и раствора используют отдельные съемные наконечники пипеток переменной вместимости. Внесение растворов в лунки проводят осторожно, не касаясь наконечниками их дна и стенок. 9.2.5 Каждый исследуемый раствор экстрактов испытуемых проб (см. 8.4) и градуировочных рас­ творов (см. 8 2.4.2) анализируют в двух повторностях. П р и м е ч а н и е — Далее приведены расходы реактивов на два стрипаЧ что достаточно для анализа трех исследуемых проб. Для другого числа проб количество используемых стрипов и смешиваемых объемов реагентов изменяют в соответствии с количеством исследуемых проб. 9.3 Проведение анализа 9.3.1 Из планшета извлекают необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы хранят в закрытом фольгированном полиэтиленовом пакете с зип-локом2' при температуре от 2 вС до 8 *С в течение всего срока годности тест-системы. 9.3.2 В лунки планшета вносят по 0.05 см3 экстрактов рабочих градуировочных растворов К,— Ks (см. 8.2.4.2) и растворов испытуемых проб. Каждый раствор вносят в двойной повторности (лунки-дубли). Внесение растворов проводят согласно приложению Б. Далее в каждую лунку вносят по 0.05 см3 рабочего раствора ферментного конъюгата (см. 8.2.8). Стрипы заклеивают пленкой или закрывают крышкой, инкубируют в термостате при температуре от 2 5С до 8 °С в течение 1 ч, после чего содержимое лунок сливают. 9.3.3 В лунки планшета вносят по 0.2 см3 раствора буфера для промывки (см. 8.2.5). оставляют на 1—2 мин и сливают. Процедуру промывки повторяют еще три раза. Остатки жидкости интенсивно стряхивают на чистую фильтровальную бумагу. 9.3.4 В лунки планшета вносят по 0.1 см3 раствора N& 5 (см. приложение А) и инкубируют в тер­ мостате при температуре 37 °С в течение 10 мин. Добавляют по 0.1 см3 раствора N9 6 (см. приложение А), аккуратно перемешивают легким постукиванием по ребру планшета. Помещают планшет в верти­ кальный фотометр и измеряют значения ОП при длине волны 450 нм. 10 Обработка результатов измерения 10.1 По показателям ОП в лунках-дублях находят среднеарифметические значения. Разность значений ОП для них в процентах от среднего не должна превышать 10. Стрип — полоска из восьми лунок. 21 Зип-лок — замок, обеспечивающий герметизацию пакета. 7
ГОСТ 33615—2015 Связывание АТ (или относительное поглощение П. %. рассчитывают по формуле П = °1 к .1 0 0 , (Ч) ОП, где ОП„ — среднее значение ОП. изморенной в лунках с экстрактами градуировочных растворов Kj—К; (см. 8.2.4) и с растворами экстрактов испытуемых проб; ОПк — среднее значение ОП. измеренной в лунках с нулевым стандартом (экстрактом градуировоч­ ного раствора К, (см. 8.2.4); По значениям процентов связывания. вычисленным для градуировочных растворов с соответству­ ющими известными значениями массовой концентрации AOZ. мкг/дм3, строят градуировочный график в полулогарифмической системе координат. 10.2 Для построения градуировочного графика используют масштабно-координатную бумагу. На ось абсцисс наносят значения логарифмов концентраций AOZ в градуировочных растворах К2—К5 (см. 8.2.4.2). По оси ординат откладывают значения процентов связывания, рассчитанные для массовых концентраций по формуле (1). Градуировочный график строят с использованием линейной зависимости. 10.3 С помощью градуировочного графика по значению процента связывания, полученного для растворов экстрактов испытуемых проб, находят логарифмы массовой концентрации в них AOZ. С помощью калькулятора вычисляют его обратное значение (антилогарифм), соответствующее мас­ совой концентрации AOZ в растворе экстракта. 10.4 Массовую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе С. мкг/дм3 (мкг/кг), рассчи­ тывают по формулеС - с - К , (2) где с — массовая концентрация AOZ в рабочем растворе экстракта испытуемой пробы, определяемая по градуировочному графику, мкг/дм3;К — коэффициент пересчета мкг/дм3 в мкг/кг в экстракте испытуемой пробы, учитывающий ее разве­ дение; для сухого молока равен 10. для остальных проб — единице. Образец записи результатов измерений приведен в приложении В. За окончательный результат принимают среднеарифметическое двух измерений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости |С> - Сг| £ 0.01 • Сер • /о т, (3) где С, и С2 — результаты определений массовой концентрации (содержания) AOZ. полученные в усло­ виях повторяемости, мкг/дм3 (мкг/кг); Сср — среднеарифметическое результатов двух определений массовой концентрации AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг); готн — предел повторяемости (%). приведенный в таблице 1. Результаты измерений массовой концентрации (содержания) AOZ, мкг/дм3 (мкг/кг). округляют до первого знака после запятой. 10.5 Допускается использование программного обеспечения, позволяющего определять мас­ совую концентрацию (содержание) AOZ в испытуемой пробе по средним значениям ОП. измеренным в лунках с экстрактами градуировочных растворов и испытуемых проб. С помощью компьютерной системы обработки данных строят градуировочную зависимость оптической плотности раствора от массовой концентрации AOZ и аппроксимируют линейной функцией. Градуировочная зависимость считается приемлемой, если рассчитанное программным обеспе­ чением значение коэффициента корреляции г*£0.98. За результат измерений принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости 2 - |С , - С » |- ю о ^ (4) ( С , * С 2) где С,, С2 — результаты параллельных определений массовой концентрации AOZ. мкг/дм3; г — значение предела повторяемости для разных диапазонов измерения (см. таблицу 1). 8
ГОСТ 33615—2015 Результат определения массовой концентрации (содержания) AOZ в анализируемой пробе представляют в виде С i 0.01 ■ U, (5) где С — массовая концентрация (содержание) AOZ в испытуемой пробе, мкг/дм3 (мкг/кг):U — значение относительной расширенной неопределенности при коэффициенте охвата к = 2. % (см. таблицу 1). 11 Контроль точности результатов измерения Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходи­ мости) и воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6 (раздел 5). 9
ГОСТ 33615—2015 П риложение А (реком ендуем ое) Комплектация тест-системы 1' «Фуразолидон — ИФА» В комплектацию тест-системы входят: Планшет 96-луночный полистироловый стрипованный для иммунологических исследований, с иммобилизо­ ванными антителами. Пакет полиэтиленовый фолыированный с зип-локом; Пленка полиэтиленовая самоклеящаясядля заклеивания планшетов. Растворы: № 1 — AOZ — раствор с известным содержанием AOZ (6.25 мкг/см3); Мг 2 — ФК — конъюгат AOZ с пероксидазой хрена; № 3 — раствор фосфатного буфера для промывки (20-кратный концентрат), pH (7,0— 7,4); № 4 — реакционный буферный раствор с добавлением бычьего сывороточного альбумина, pH (7.0— 7.4), стерильный: № 5 — раствор субстрата на основе 3,3',5,5'-ТМБ сдобавлением перекиси водорода; Мг 6 — стоп-реагент — раствор серной кислоты молярной концентрации 0.5 моль/дм-3; № 7 — раствор натрия ацетата молярной концентрации 3.0 моль/дм3; № 8 — раствор 2-нитробензальдегида в ДМСО с молярной концентрацией 0,01 моль/дм3. " Данный комплект реагентов является рекомендуемым и приведен для удобства пользователей настояще­ го стандарта. Приложение Б (реком ендуем ое) Схема заполнения лунок планшета Внесение реагентов следует проводить согласно следующей схеме. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 А К, К, Мг 4 Ns 4 Ns 12 Мг 12 Ns 20 Мг 20 Ns 28 Ns 28 Ns 36 Мг 36 В к* к2 № 5 N? 5 Ns 13 Ns 13 Ns 21 Мг 21 Ns 29 Ns 29 Ns 37 Мг 37 С к 3 К3 Ms 6 Ns 6 Ns 14 Мг 14 Мг 22 Мг 22 Ns 30 Ns 30 Ns 38 Мг 38 D к< к. Мг 7 N? 7 Ns 15 Мг 15 Мг 23 Мг 23 Ns 31 Ns 31 Ns 39 Мг 39 Е Кь Ms 8 Ns 8 Ns 16 Мг 16 Мг 24 Мг 24 Ns 32 Ns 32 Ns 40 Мг 40 F N5 1 Мг 1 Мг 9 N? 9 Ns 17 Мг 17 Мг 25 Мг 25 Ns 33 Ns 33 Ns 41 Мг 41 G Ns 2 № 2 № 10 Ns 10 Ns 18 Мг 18 Мг 26 Мг 26 Ns 34 Ns 34 Ns 42 Мг 42 Н № 3 № 3 Ns 11 № 11 Ns 19 Мг 19 Мг 27 Мг 27 Ns 35 Ns 35 Ns 43 Мг 43 10
ГОСТ 33615—2015 П рилож ение В (реком ендуем ое) Таблица для записи результатов измерения Т а б л и ц а В.1Массовая концентрацияЗначение ОП(содержание) AOZМаркировка£ 2 : . 100. %вариантаОП, 1 Н}| С о исследуемойв экстракте с.по лункамсреднеепробе С.ыкг/ды5 м к г . ' д м !(мкг/кг) к,0 к,к*0.30.5 К* к,0.42.5Ks К ч 1,112.5 К чк* 1 .862.5к*№ 1№ 1N9 ...N9 ...№ 42№ 42№ 43№ 43 11
ГОСТ 33615—2015 УДК 664:615.28:006.354 МКС 67.050 67.100 67.120 Ключевые слова: продукты пищевые, продовольственное сырье, метаболит фуразолидона. остаточное содержание, иммумоферментный метод, прецизионность метода, тест-система, антиген, антитела, оптическая плотность, ферментный конъюгат Р е д а кто р К .В .Д у д к о Т е х н и ч е с ки й р е д а кто р В .Ю . Ф о т и е а а К о р р е кто р М .8 . Б уйная К о м п ь ю т е р н а я в е р с тка И .Л . Н а л е й к и н о й С д ан о в набор 19.02 2 0 1 6 . П о д п и с а н о в п е ча ть 2 5 .0 3 .2 0 1 6 . Ф о р м а т 8 0 * 8 4 Г а р н и тур а А р иал У ел. п е ч. п . 1,86. У ч .-и зд . п. 1.40. Т и р а ж 35 экэ. З а к. 857. И з д а н о и о т п е ч а т а н о в о Ф Г У П « С Т А Н Д А Р Т И Н Ф О Р М » , 123995 М о сква . Г р а н а тн ы й п е р .. 4w w w .90stin fo .ruin fo @ 90stin fo .ruГОСТ 33615-2015

Похожие документы