Все госты и снипы онлайн

Более 10000 документов в открытом доступе, абсолютно бесплатно

ГОСТ 33635-2015 - Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Испытание токсичности на хирономидах с использованием обогащенного осадка

Этот документ был распознан автоматически. В блоке справа Вы можете найти скан-копию. Мы работаем над ручным распознаванием документов, однако это титанический труд и на него уходит очень много времени. Если Вы хотите помочь нам и ускорить обработку документов, Вы всегда можете сделать это, пожертвовав нам небольшую сумму денег.

Файлы для печати:

М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й С О В Е Т П О С Т А Н Д А Р Т И З А Ц И И , М Е Т Р О Л О Г И И И С Е Р Т И Ф И К А Ц И И(М Г С )IN T E R S T A T E C O U N C IL F O R S T A N D A R D IZ A T IO N . M E T R O L O G Y A N D C E R T IF IC A T IO N(IS C )ГОСТ М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й 33635 С Т А Н Д А Р Т — 2015МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ,ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЙ ОПАСНОСТЬДЛЯ ОКРУЖАЮ Щ ЕЙ СРЕДЫИспытание токсичности на хирономидахс использованием обогащенного осадка OECD, Test No. 218:2004 (MOD)И з д а н и е о ф и ц и а л ь н о еМосква Стаидлртинформ 2016образец сертификата
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5 ПредисловиеЦ е л и , осно в ны е принципы и ос но в но й п о р я д о к п р о в е д ен и я р а б о т по м е ж го су д а р ств ен н о й с т а н ­д а р т и з а ц и и ус танов л ен ы Г О С Т 1 .0 — 9 2 « М е ж го с у д а р с тв е н н а я си с те м а с т а н д а р т и за ц и и . О сн о в н ы е по­л о ж е н и я » и Г О С Т 1.2— 2 0 0 9 « М е ж го с у д а р с тв е н н а я с и с те м а ста н д а р т и за ц и и . С т а н д а р ты м е ж го с у д а р ­ств ен н ы е . п р ав и л а и р е ко м е н д а ц и и по м е ж го су д а р ств ен н о й ста н д а р т и за ц и и . П р а в и л а р а зр а б о тки ,п р и н я ти я , п р и м е н е н и я , о б н о в л ен и я и отм ены »С в е д е н и я о с т а н д а р т е1 П О Д Г О Т О В Л Е Н Ф ед ер а л ь н ы м госуд арств енн ы м у н и та р н ы м п р е д п р и я ти е м «В се р о сси й ски й н а ­уч н о -и сс л ед о в а те л ь ски й и н с ти тут с т а н д а р т и за ц и и м а т е р и а л о в и т ехн о л о ги й » (Ф Г У П « В Н И И С М Т » ) наосно в е с о б ств ен н о го п е р е в о д а н а русский язы к д о к у м е н т а , ука за н н о го в п ун кте 42 В Н Е С Е Н Ф е д е р а л ь н ы м а ге н тств о м по те х н и ч е с ко м у регул и р о в а н и ю и м етрол огии3 П Р И Н Я Т М е ж го с у д а р с тв е н н ы м со в ето м по с т а н д а р т и за ц и и , м етр о л о ги и и с е р т и ф и ка ц и и (п р о ­токо л от 10 д е к а б р я 2 0 1 5 г. № 4 8 -2 0 1 5 )З а п р и н я ти е прого ло со в али : К р а т ко е н а и м е н о в а н и е стр аны Код с тр а н ы п о М К С о в р а щ е н н о е н а и м е н о в а н и е н а ц и о н а л ь н о го о р га н а п о М К (И С О 316 6 ) 0 0 4 - 9 7 < И С 0 3 16 6) 0 0 4 - 97 п о ста н д а р ти за ц и иАрменияAMМинэкономики Республики АрменияКазахстанKZГосстандарт Республики КазахстанКиргизияKGКыргызстандартМолдоваMDМолдова-СтандартРоссияRUРоссгандарт4 П р и казо м Ф ед е р а л ь н о го а ге н т с т в а по т е х н и ч е с ко м у р егул и р о в а н и ю и м етр ол оги и от 11 д е к а б р я2 0 1 5 г. N° 2 1 5 5 -с т м еж го су д а р ств ен н ы й с т а н д а р т Г О С Т 3 3 6 3 5 - 2 0 1 5 в в ед ен в д е й с т в и е в ка ч е с т в е н а ­ц и о н ал ь н о го с т а н д а р т а Р о сси й ской Ф е д е р а ц и и с 1 с е н тя б р я 2 0 1 6 г.5 Н а с т о я щ и й с т а н д а р т я в л я е тся м о д и ф и ц и р о в а н н ы м по о т н о ш е н и ю к м е ж д у н а р о д н о м у д о к у м е н ­т у O E C D T e s t N o . 2 1 8 .2 0 0 4 S e d im e n t-W a te r C h iro n o m id To xicity T e s t U sin g S p ik ed S e d im e n t. (И с п ы т а н и ет о к с и ч н о с т и н а х и р о н о м и д а х с и с п о л ь з о в а н и е м о б о г а щ е н н о г о о с а д к а ) п утем и з м е н е н и я структуры .С р а в н е н и е структуры м е ж д у н а р о д н о го д о к у м е н т а с о стр у кту р о й н а с т о я -щ е го с т а н д а р т а п р и в е д е н о вд о п о л н и тел ь н о м п р и л о ж е н и и Д А .Н а и м е н о в а н и е н а с т о я щ е го с т а н д а р т а и з м е н е н о о тн о си тел ь н о н а и м е н о в а н и я м еж д у н а р о д н о го д о ­ку м е н т а д л я п р и в е д е н и я в со о тв етств и е с Г О С Т 1 .5 (п у н кт 3 .5 ).П е р е в о д с ан гл ий ского я зы ка (o n ).С т е п е н ь со отв етств ия — м о д и ф и ц и р о в а н н а я (M O D )6 В В Е Д Е Н В П Е Р В Ы ЕII
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информаци­онном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — е ежемесячноминформационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или от­мены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячноминформационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведом­ление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования на офи-циалыюм сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сетиИнтернет.© С там д арти нф о рм . 2 0 1 6В Р оссийской Ф е д е р а ц и и н а с т о я щ и й с та н д а р т н е м о ж ет бы ть полностью ил и ч а с т и ч н о в о с пр о и з­в ед ен . ти р аж и р о в ан и р а с п р о с тр а н е н в ка ч е с тв е о ф и ц и ал ь н о го и зд ан и я б е з р а з р е ш е н и я Ф ед ер а л ь н о гоа ге н т с т в а по т е х н и ч е с ко м у регул и р о в а н и ю и м етр ол оги иIII
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5 Содержание1 О б л а с ть п р и м е н е н и я ....................................................................................12 Т е рм и н ы и о п р е д е л е н и я .......................................................................13 П р и н ц и п м е т о д а ................................................................14 И н ф о р м а ц и я о б и сп ы ту ем о м в е щ е с т в е ..............................................15 С т а н д а р тн ы е в е щ е с т в а .......................26 Д о с то в е р н о с ть и с п ы т а н и я .............................................................................................................................................................27 О п и с а н и е м е т о д а ...............................................................................................................................................................................27.1 И с п ы туе м ы е с о с у д ы ............................................................................................................................................................... 27 .2 В ы бор ви да х и р о н о м и д .......................................................................................................................................................... 27 .3 О с а д о к ............................................................................................................................................................................................27 .4 В о д а .................................................................................................................................................................................................37 .5 С то ко в ы е растворы — о б о га щ е н н ы й о с а д о к .............................................................................................................. 38 Д и з а й н и с п ы та н и я ............................................................................................................................................................................... 38.1 Д и з а й н д л я р е гр е сси о н н о го а н а л и з а ..............................................................................................................................48 .2 Д и з а й н д л я ус та н о в л ен и я N O E C /L O E C ...............................................................................................48 .3 О п р е д е л е н и е д и а п а з о н а пред ел ь ны х к о н ц е н т р а ц и й ............................................................................................ 49 П р о в е д е н и е и с п ы т а н и я ........................................................................................................................................49.1 У сл ов и я и с п ы т а н и я ...............................................................................49 .2 Н а б л ю д е н и я ................................................................................................................................................................................. 69 .3 А н а л и т и ч е с ки е о п р е д е л е н и я ............................610 Д а н н ы е и о тч ет о п р о в е д ен и и и с п ы та н и я ......................................................................................................................... 710.1 О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в ........................................................................................................................................................71 0 .2 О т ч е т о п р о в е д ен и и и с п ы т а н и я ...................................................................................................................................... 8П р и л о ж е н и е А (р е к о м е н д у е м о е ) Р е ко м е н д а ц и и по культивированию Chironomus riparius....................... 10П р и л о ж е н и е Б (р е к о м е н д у е м о е ) П р и го то в л ен и е и скусств ен но го о с а д к а ........................................................... 13П р и л о ж е н и е В (р е к о м е н д у е м о е ) Х и м и ч е с к и е х а р а кте р и с ти ки п р и е м л е м о й воды.п р е д н а зн а ч е н н о й д л я р а з в е д е н и я ............................................................................................................... 14П р и л о ж е н и е Г (р е к о м е н д у е м о е ) Р уков о дств о д л я м о ни то р и н гав ы л уп л я ем о сти л и чи н о к х и р о н о м и д ..........................................................................................................15П р и л о ж е н и е Д А (с п р а в о ч н о е ) С р а в н е н и е структуры м еж д у н а р о д н о го д о ку м е н тас о стр у кту р о й н а с т о я щ е го с т а н д а р т а .....................................................................................................16Б и б л и о гр а ф и я ....................................................................................................................................................................................... 19IV
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5 ВведениеВ о сно в ном н а с т о я щ и й с т а н д а р т о с н о в ан н а с у щ е с тв у ю щ и х п р отоко л ах по о ц е н к е токси чно стид л я C h iro m o n u s riparius и C h iro m o n u s te n ta n s . кото ры е б ы л и ра зр аб о та н ы в Е в р о п е и С е в е р н о й А м е р и ке[2 ]-[8 ], и кол ьцевом м е то д е [1]. [6 ], [9].В д а н н о м с т а н д а р т е и спол ьзован протоко л в озд ей ств ия ч е р е з о б о га щ е н и е о с а д к а . В ы бор с о о т ­в етств ую щ его п р о то ко л а в озд ей ств ия зав и си т от п р е д п о л а га е м о го п р и м е н е н и я и сп ы тани я . П р отоко лс о б о га щ е н и е м о с а д к а п р е д н а зн а ч е н д л я и м и та ц и и а кку м ул и р о в а н н ы х ур о в н ей хи м и ч ески х в е щ е с тв ,п е р с и с те н тн ы х в о с а д ке . Д а н н а я с и с те м а в о зд е й ств и я в кл ю ч а е т о б о га щ е н и е о с а д ка и сп ы туем о й с и с т е ­мы «о с а д о к — в о д а » .В е щ е с т в а , т р е б у ю щ и е о ц е н ки и х вл ия н и я н а ор ган и зм ы , за с е л я ю щ и е о с ад о к, ка к п р ав и л о , н а х од я тс я в д а н н о й с р е д е в т е ч е н и е д л и те л ь н о го п е р и о д а в р е м ен и . О р ган и зм ы , за с е л я ю щ и е осад ок, м огутподв ергать ся в оздей ств ию х и м и ч е с ки х в ещ ес тв целы м ряд ом п утей . О т н о с и т е л ь н о е з н а ч е н и е каж догоп ути воздей ств ия и в р е м я , т р е б у ю щ е е с я д л я каж д о го и з них в п роя в л ен ии о б щ и х то кси ч ески х э ф ф е к ­тов. зав и си т о т ф и зи ко -хи м и ч ески х свойств и сп ы туем о го х и м и ч еско го в е щ е с тв а . Д л я в ещ ес тв с высокойа д с о р б ц и е й (н а п р и м е р , с log K ow > 5 ) и л и д л я с о е д и н е н и й , ко в а л е н тн о св я зы в аю щ и хся с о т л о ж е н и я м и ,п о гл о щ е н и е о р га н и зм а м и з агр я зн е н н о го ко р м а м о ж е т бы ть осно в ны м п утем в оздей ств ия. Д л я п р ед ­у п р е ж д е н и я н ед о о ц ен ки токси ч но сти вы соколипоф ильны х с о е д и н е н и й кор м д о б а в л я ется д о в н е сен и яи сп ы туем о го в е щ е с тв а . Д ан н ы й с та н д а р т о с н о в ан н а д л и те л ь н о м в оздей ств ии д л я о ц е н ки всех воз­м о ж н ы х п у те й вл ия н и я и сп ы ту ем о го в е щ е с тв а н а л и чи но к. П р о д о л ж и те л ь н о с ть и сп ы та ни я н ахо ди тсяв п р е д е л а х 2 0 - 2 8 сут д ля C h iro m o n u s riparius и C h iro m o n u s yo shim atsui и 2 8 - 6 5 с у т д л я C h iro m o n u ste n ta n s . Е сл и д л я о п р е д е л е н н о й ц е л и т р еб ую тся р е зу л ь таты кр аткоср оч ны х и с с л е д о в а н и й , н а п р и м е рд л я о ц е н ки э ф ф е к то в н естаб и л ь н о го х и м и ч еско го в е щ е с тв а , то из п р о б и зв л ека ю т д о п о л н и тел ь н ы е по­в торн ости и а н а л и зи р у ю т 1 0 сут.И з м е р я е м ы м и кон ечны м и точ кам и являю тся о б щ е е ко л и че ств о вы л упивш ихся взрослы х о с о б е й ив р е м я д о и х в ы л упл ен и я. Е сл и треб ую тся результаты кр аткоср оч ны х и сс л ед о в а н и й , то р е ко м е н д у е тс яп роводить о ц енку в ы ж и в аем ости и р о ста л и чи н о к н е р а н е е ч е м н а 1 0 - е сутки, используя при этом д о ­п о л ни тел ьн ы е п овторности по м е р е н еоб ход и м ости .Р е ко м е н д у е тс я и сп ол ьзовать искусств ен ны й осад ок. И скусств енн ы й о с а д о к и м ее т н еско ль ко п р е ­и м у щ е с тв по ср ав н е н и ю с природны м и о тл о ж е н и я м и :- в ар и аб ел ь н о сть в э к с п е р и м е н т а х с н и ж а е тс я з а с ч е т того, ч то он п р ед став л я е т воспроизводимы й« с та н д ар ти зо в ан н ы й м атр и кс» и о т п а д а е т н ео б хо д и м о с ть в п ои ске н е за гр я з н е н н о го и чи с то го о с ад ка;- и сп ы та ни я м о ж н о н ачи н ать в л ю б о е в рем я го д а, н е стал ки в ая сь с се зо н н о й в ар и абел ь но сть юи сп ы туем о го о с а д к а , и отсутств ует н ео б хо д и м о с ть в п ред в ар и тел ь н о й о б р а б о т к е о с а д ка д л я у д ал ен и яп ри ро дн ой ф аун ы ; п р и м е н е н и е и скусств ен но го о с а д к а т а к ж е с н и ж а е т затраты н а отб о р в ес те ств е н н ы хус л о в и я х д о стато ч н о го ко л и ч е ств а о с а д ка д ля о б ы чн ого испы тания;- п р и м е н е н и е и скусств ен но го о с а д ка п озво ля ет ср ав н и ть токси ч но сть и кл а сс и ф и ц и р о в ать в е щ е ­ств а со о тв етств ую щ и м о б р азо м .И с п о л ь зов ан ны е о п р е д е л е н и я п ри в ед ены в р а зд е л е 2.V
ГОСТ 33635— 2015МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙСТАНДАРТМ Е Т О Д Ы И С П Ы Т А Н И Й Х И М И Ч Е С К О Й П Р О Д У К Ц И И ,П Р Е Д С Т А В Л Я Ю Щ Е Й О П А С Н О С Т Ь Д Л Я О К Р У Ж А Ю Щ Е Й С Р Е Д ЫИ с п ы т а н и е т о к с и ч н о с т и н а х и р о н о м и д а х с и с п о л ь з о в а н и е м о б о г а щ е н н о г о о с а д к аTesting of chemicals of environmental hazard.Sedim ent-W ater Chironomid Toxicity Test Using Spiked SedimentД ата введения — 2016— 09— 01 1 Область примененияН а с т о я щ и й с т а н д а р т ус та н а в л и в а е т м ето д о ц е н ки вл ия н и я п род ол ж и тель н ого в озд ей ств ия и с ­п ы туем ого х и м и ч еско го в е щ е с тв а ч е р е з о б о га щ е н и е о с а д ка на л и чи нки п реснов о дн ы х двукры лы хChironomus sp., засе л я ю щ и е естественн ы е отл о ж е ни я . М о ж но использовать д руги е хо ро ш о известны евиды х и р о н о м и д . н а п р и м е р Chironomus yoshimatsui [10]. [11]. 2 Термины и определенияВ н а с т о я щ е м с т а н д а р т е п р и м ен ен ы с л е д у ю щ и е тер м и н ы с со о тв етств ую щ и м и о п р е д е л е н и я м и :2.1 и с к у с с т в е н н ы й и л и р е к о н с т р у и р о в а н н ы й , с о с т а в л е н н ы й и л и с и н т е т и ч е с к и й о с а д о к(fo rm u la te d s e d im e n t o r reco nstituted, artificial o r sy nth etic s e d im e n t): С м е с ь в ещ ес тв , и сп ол ьзованны х д л яи м и та ц и и ф и зи ч ески х ко м п о н ен то в при ро дн ого о с а д ка .2 .2 н а д о с а д о ч н а я в о д а (o verlyin g w a te r): В од а, н а х о д я щ а я с я н а д о с а д ко м в и сп ы ту ем о м со суд е.2 .3 и н т е р с т и ц и а л ь н а я в о д а и л и п о р о в а я в о д а (interstitial w a te r): В о д а, з а н и м а ю щ а я п р о с тр ан ­ств о м е ж д у о с а д ко м и ч а с т и ц а м и почвы.2 .4 о б о г а щ е н н ы й о с а д о к (s p ike d se d im en t): О с а д о к, в которы й д о б а в л е н о и сп ы ту е м о е в ещ ес тв о . 3 Принцип методаЛ и ч и нки хи р о н о м и д перв о й с та д и и ра зв и ти я подв ергаю тся в оздей ств ию и сп ы туем о го х и м и ч еско гов е щ е с тв а в р я д е ко н ц е н тр а ц и й в с и с те м а х о с а д о к — вода. И с п ы ту е м ы е в е щ е с тв а вно сят в о с а д о к, аз а т е м л и чи нки хи р о н о м и д перв о й с та д и и ра зв и ти я д о б а в л я ю т в и сп ы ту ем ы е ста ка н ы со стаб и л и зи р ован ны м и ко н ц е н тр а ц и я м и в о с а д к е и воде. В ко н ц е исп ы тани я о п р е д е л я ю т в ы л уп л ен и е и ско ро сть р а з ­в и тия хи р о н о м и д . Т а к ж е при н ео б хо д и м о с ти ч е р е з 10 сут оп р е д ел я ю т в ы ж и в ае м о сть и м а с с у л и чи но к(и спол ьзуя д о п о л н и тел ь н ы е п ов торн ости ). П о л у ч е н н ы е д а н н ы е ан ал и зи р ую т, используя р егресси он н уюм о дел ь , д л я ус та н о в л ен и я ко н ц е н тр а ц и и , ко то р ая буд ет вызывать х % с н и ж е н и е в ы л упл ен и я, вы ж и в а­е м о с т и или р о с т а л и чи н о к (н а п р и м е р . E C 1S, Е С 50 и т. п .), и л и . используя п р о в е р ку с та ти с ти ч е с ко й гипо­тезы . д л я о п р е д е л е н и я N O E C /L O E C (н е э ф ф е кти в н о й н а б л ю д а е м о й к о н ц е н тр а ц и и /н а и м е н ь ш е й н а б л ю ­д а е м о й э ф ф е кти в н о й ко н ц е н тр а ц и и ). Д л я п о сл ед н его а н а л и з а т р еб уется с р а в н е н и е з н а ч е н и й э ф ф е к тас кон трол ь ны м и з н а ч е н и я м и с и сп о л ь зо в ани ем с т а ти с ти ч е с ки х м ето дов . 4 Информация об испы туем ом веществеН е о б хо д и м о и м еть св е д ен и я о ра ств о р и м о сти и сп ы туем о го в е щ е с тв а в воде, д а в л е н и и п ар а , и з ­м е р е н н о м ил и р а сс ч и та н н о м р а с п р е д е л е н и и в о с а д к е и с таб и л ь н о сти в вод е и о с а д к е . Д о л ж е н бытьИ зд ани е оф ициальное 1
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5в н ал и ч и и н а д е ж н ы й а н а л и ти ч е с ки й м ето д д л я ко л и че ств ен н о го о п р е д е л е н и я и сп ы ту ем о го в ещ ес тв ав н ад о с а д о ч н о й ж и д ко с ти , поро в ой вод е и о с а д к е с известно й и у с та н о в л ен н о й точностью и н и ж ни мп р е д е л о м о б н а р у ж е н и я . П о л о зн а я и н ф о р м а ц и я в кл ю ч ае т с тр у кту р н ую ф о р м у л у и чи с то ту и спы туем огов е щ е с тв а . Т а к ж е пол езн ы м и являю тся св е д ен и я о х и м и ч еско м п о в ед ен и и и сп ы туем о го в е щ е с тв а (н а ­п р и м ер . р а с с е я н и и , р а зр у ш е н и и в аб и о т и ч е с ки х и би о ти ч ески х ус л о в и я х и т. п .). Д о п о л н и т е л ь н о е р у ко ­водство по и сп ы тани ю в е щ е с тв с ф и зи ко -х и м и ч е с ки м и св о й ствам и , которы е затруд няю т п р о в е д ен и еи сп ы тани я , п р и в е д е н о в [1 2 ]. 5 Стандартные веществаС т а н д а р тн ы е в е щ е с тв а п ер и о д и ч е ски п од в ергаю т и сп ы тани ю д л я п о д тв ер ж д е н и я того, ч то п р о ­токо л и сп ы та ни я и ус л о в и я исп ы тани я являю тся н а д е ж н ы м и . П р и м е р а м и с т ан д а р тн ы х т о кси ка н то в ,у с п е ш н о и спол ьзуем ы х в кольцевы х м ето д ах и при в а л и д а ц и и , являю тся: л и н д а н , тр и ф л у р ал и и . пен-т а х л о р ф е н о л , хл о р и д ка д м и я и х л о р и д ка л и я [1]. [2]. [5]. [6 ]. [13]. 6 Д остоверность испытанияД л я исп ы тани я использую т с л е д у ю щ и е кри тер и и д о стов ерно сти :- в ы л упл ен и е в ко н тр о л я х д о л ж н о со став л я ть в ко н ц е исп ы тани я н е м е н е е 7 0 % [1]. [6 ];- п ери о д в ы л упл ения л и чи н о к С. riparius и С. yoshimatsui во взрослы е о с о б и в кон трол ьны х с о ­судах д о л ж е н нахо ди ть ся в п р е д е л а х от 12 д о 2 3 сут п о сл е их в н е с е н и я в сосуд ы , а д л я С. tentans т р е ­буется 2 0 - 6 5 сут;- в ко н ц е исп ы тани я оп р е д ел я ю т p H и к о н ц е н тр а ц и ю р а с тв о р е н н о го ки сл ор од а в ка ж д о м со суд е.К о н ц е н т р а ц и я ки сл о р о д а д о л ж н а с о став л я ть н е м е н е е 6 0 % от зн ач ен и я н а с ы щ е н и я воздухом (A S V )при и сп ол ь зо в анн ой т е м п е р а ту р е , а pH н ад о с а д о ч н о й воды н ахо д и тся в д и а п а з о н е 6 - 9 во всех и сп ы ­т уем ы х сосуд ах;- т е м п е р а т у р а воды н е д о л ж н а р а зл и ча ть ся б о л е е ч е м н а ± 1 .0 °С . Т е м п е р а т у р у воды с л ед ует к о н ­тр о л и р о в ать в и зо тер м и ч еско м п о м е щ е н и и ч е р е з о п р е д е л е н н ы е п р о м е ж у тки врем он и . 7 Описание метода7.1 И с п ы т у е м ы е с о с у д ыИ с п ы т а н и е п ров о дят в стекл я н н ы х с т а к а н а х в м ести м о сть ю 6 0 0 мл с д и а м е т р о м 8 см . П р и о б е ­сп еч ен и и со о тв етств ую щ ей вы соты с л о я н ад о сад о ч н о й воды и о с а д к а пригодны и д р у ги е сосуды .П о в ер х н о сть о с а д к а д о л ж н а бы ть д о с та то ч н о й д л я о б е с п е ч е н и я 2 - 3 см 2 н а личинку. С о о т н о ш е н и е вы­соты сл о я о с а д ка к вы соте н ад о с а д о ч н о й воды д о л ж н о со став л я ть 1 :4. И с п ы туе м ы е сосуды и д р уго ео б о р уд о в ан и е , ко то р о е к о н т а кт и р у е т с и сп ы туем о й си с те м о й , д ол ж ны бы ть изготовлены пол ность ю изс т е кл а ил и д руго го хи м и ч ески и не р тн о го м а т е р и а л а (н а п р и м е р , т е ф л о н а ).7 .2 В ы б о р в и д а х и р о н о м и дП р ед по чти тел ь н ы м видом д л я и сп ол ьзования в и спы тании яв л я ется Chironomus riparis, м о ж н ои спол ьзовать Chironomus tentans. но с н им т р у д н е е р а б о та ть и тр еб уется б о л е е д л ител ьн ы й п ер и о ди сп ы тани я . Т а к ж е м о ж ет и спол ь зо в аться Chironomus yoshimatsui. П о д р о б н о е о п и с а н и е м ето д ов кул ь­т и в и р о в ан и я Chironomus riparis п р ивод ится в п р и л о ж ен и и А . И м е е т с я и н ф о р м а ц и я о б ус л о в иях культи­в и р о в ани я д ля д р уги х видов, т. е . Chironomus tentans [4] и Chironomus yoshimatsui [11]. П е р е д н ач а л о мисп ы тани я п ров о дят и д е н т и ф и ка ц и ю в и д а , но э то н е т р еб уется д л я каж д о го и сп ы тани я , ес л и организм ыпрои сход ят и з в н у тр и л а б о р ато р н о й культуры.7 .3 О с а д о к7 .3 .1П р ед п о ч ти те л ь н о и сп ол ьзовать и скусственны й о с а д о к (т а к ж е н азы в а ем ы й р е ко н с тр у и р о в а н ­ны м . со став л е н н ы м ил и с и н те ти ч е с ки м ). Е сл и использую т п риродны й о с а д о к, то е го с л ед ует о х а р а к­те р и зо в а ть (о п р ед е л и ть p H . с о д е р ж а н и е о р ган и ч ес ко го угл е р о д а , а т а к ж е р е ко м е н д ую тся т а ки е п а р а ­м етр ы . ка к с о о т н о ш е н и е C /N и гр а н у л о м е т р и я ), и он н е д о л ж е н с о д е р ж а ть ка ки х -л и б о за гр я з н е н и й ид р у ги х о р ган и зм о в , ко н кур и рую щ и х с хи р о н о м и д а м и или п и таю щ и хс я и м и . Т а к ж е п е р е д и сп о л ь зо в а­н и е м в и с п ы та н и и т о к с и ч н о с т и д л я х и р о н о м и д п р и р о д н ы й о с а д о к ко н д и ц и о н и р у ю т в т е ч е н и е 7 сут 2
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5в т е х ж е усло в ия х, в которы х будут п роводить п о с л е д у ю щ е е и сп ы та ни е. В д а н н о м и сп ы тани и [1], [15].[1 6] р е ко м е н д у е т с я п р и м ен я ть сл ед ую щ и й искусств ен ны й о с а д о к н а о с н о в е и скусств ен но й почвы, и с ­п о л ьзов а нн ой в с т а н д а р т е 2 0 7 [14]:а ) 4 - 5 % (с у х а я м а с с а ) т о р ф а : p H ка к м о ж н о б л и ж е к 5 ,5 - 6 ,0 ; в аж н о и спол ьзовать то р ф в в и д е и з ­м ел ьченного п о р о ш ка (р а з м е р ча сти ц S 1 м м ), в ы суш ен но го тол ь ко на воздухе;б) 2 0 % (с у х а я м а с с а ) као л и н о в о й глины (с о д е р ж а н и е ка о л и н и та п ред по чти те л ь н о в ы ш е 3 0 % );в) 7 5 - 7 6 % (с у х а я м а с с а ) кв ар ц ев о го п е с ка (д о л ж е н п р е о б л а д а ть м ел ки й п е с о к с б о л е е ч е м 5 0 %ч а с т и ц р а зм е р о м в п р е д е л а х от 5 0 д о 2 0 0 мкм);г) д е и о н и зи р о в а н н а я вода д о б а в л я е тс я д л я о б е с п е ч е н и я в л аж н о сти кон еч но й с м е с и в п р ед ел ах3 0 - 5 0 % ;д ) хи м и ч ески чисты й к а р б о н а т кал ь ц и я (С а С О э ) д о б а в л я ется д л я д о в е д е н и я p H кон еч но й см есио с а д ка д о (7 .0 ± 0 ,5 ). С о д е р ж а н и е органического угл ер од а конечной см еси д о л ж н о с оставлять (2 ± 0 .5 ) %и д о в о д и ть с я с о о тв етств ую щ и м и ко л и ч е ств ам и то р ф а и п е с к а по п ер е ч и с л е н и я м а ) и в).7 .3 .2Н е о б х о д и м о и м еть и н ф о р м ац и ю о б и сто ч ни ке т о р ф а , као ли н ов о й глины и п е с ка . К о м по нентыо с а д к а и ссл ед ую т н а о тсу тс тв и е хи м и ч еско го за гр я з н е н и я (н а п р и м е р , тя ж ел ы м и м е т а л л а м и , х л о р о р га-и и ч е ски м и с о е д и н е н и я м и , ф о с ф о р о р га н и ч е с ки м и с о е д и н е н и я м и и т. п .). П р и м е р п ол учени я и ску сств ен ­ного о с а д к а о п и сан в п р и л о ж е н и и Б. Т а к ж е со с та в л я ю щ и е ко м по нен ты с м е ш и в а ю т в сухом в и д е, ес л ибы л о п о ка за н о , ч то п о с л е д о б а в л е н и я н ад о с а д о ч н о й воды н е п рои сход и т р а зд е л е н и я ко м п о н ен то в ( н а ­п р и м е р , всплы тия ч а с т и ц т о р ф а ) и ч то т о р ф ил и о с а д о к б ы л и д о с та то ч н о конд иц и о ни р ов ан ы .7 .4 В о д аВ ка ч е с т в е испы туем о й воды использую т лю бую воду, со отв етств ую щ ую по своим х и м и ч ески м х а ­р а кте р и с т и ка м п р и е м л е м о й вод е д л я р а зв е д е н и я , ка к у к а з а н о в п р и л о ж ен и я х А и В . Л ю б а я п о д х о д я щ а явод а — п р и р о д н ая вод а (п о в ер хн о стн ая ил и гр унтов ая в о д а), в о с стан о в л е н н ая вода (см. п р и л о ж е н и е А )ил и д е х л о р и р о в а н н а я водоп ро в одн ая вода — яв л я ется п р и е м л е м о й в ка ч е с т в е воды д л я кул ьтивиро­в ан и я и воды д л я и сп ы тани я , ес л и хи р он ом и д ы будут в ы ж и в ать в н е й во в рем я кул ьтивирования и п р о ­в ед ен и я и сп ы та ни я б е з п р и зн ако в с т р е с с а . В н а ч а л е исп ы тани я з н а ч е н и е p H и сп ы туем о й воды д ол ж нос о став л я ть о т 6 д о 9 . и о б щ а я ж ес тко сть д о л ж н а бы ть н е в ы ш е 4 0 0 м г/л по С а С 0 3. О д н а к о е с л и и м еетсяп р е д п о л о ж е н и е о в заи м о д ей ств и и ионов ж е с тко с т и с и спы туем ы м в ещ ес тв о м , то н ео б хо д и м о и сп ол ь ­зовать воду с б о л е е н изко й ж ес тко сть ю (и таки м о б р а з о м , в д а н н о й си туац и и н е с л е д у е т использоватьс р е д у E le n d t M e d iu m М 4 ). Во в р е м я всего исп ы тани я использую т о д и наков ы й ти п воды. Х ар а кте р и с т и кика ч е с тв а воды, п р и в ед ен н ы е в п р и л о ж ен и и В. о п р е д е л я ю т н е м е н е е д вух р а з в год ил и при н ал и ч и и по­д о з р е н и я . ч то д а н н ы е х а р а кт е р и с т и ки м огли с у щ е с т в е н н о и зм ен ить ся .7 .5 С т о к о в ы е р а с т в о р ы — о б о г а щ е н н ы й о с а д о кО б о га щ е н н ы й о с а д о к с в ы б р ан н о й к о н ц е н т р а ц и е й о б ы ч н о го то в ят д о б а в л е н и е м р а с т в о р а и с ­п ы ту ем о го в е щ е с т в а н е п о с р е д с тв е н н о к о сад ку. С то ко в ы й р а с т в о р и сп ы ту ем о го в е щ е с т в а в д е и о ­н и з и р о в а н н о й вод е с м е ш и в а ю т с и с ку с с тв е н н ы м о с а д ко м н а ро л и ко в о й м е л ь н и ц е , к о р м о с м е с и т е л еил и п е р е м е ш и в а н и е м в ручн ую . Е сл и и с п ы ту е м о е в е щ е с тв о п л о хо р а с тв о р я е тс я в в од е, т о е го м о ж н ор а с т в о р и т ь в м и н и м а л ь н о м о б ъ е м е п о д х о д я щ е го о р га н и ч е с ко го р а с т в о р и т е л я (н а п р и м е р , в ге к с а н е ,а ц е т о н е ил и х л о р о ф о р м е ). П о с л е э то го д а н н ы й р а с т в о р с м е ш и в а ю т с 1 0 г м е л ко го кв а р ц е в о го п е с кад л я ка ж д о го и сп ы ту ем о го с о с у д а . З а т е м р а с т в о р и т е л ь в ы п а р и в аю т д о е го п о л н о го у д а л е н и я из п е с ка ;п е с о к с м е ш и в а ю т с с о о тв етств ую щ и м к о л и ч е с тв о м о с а д к а на ка ж д ы й и сп ы туем ы й со суд . Д л я с о л ю ­б и л и з а ц и и , д и с п е р ги р о в а н и я ил и э м у л ь ги р о в а н и я и сп ы ту ем о го в е щ е с тв а и сп ол ь зую т тол ь ко л е г к о ­л е т у ч и е р а с т в о р и т е л и . С л е д у е т и м еть в виду, ч то ко л и ч е ств о п е с ка , в х о д я щ е е в с м е с ь и сп ы ту ем о гов е щ е с т в а и п е с к а , н е о б х о д и м о уч и ты в а ть п р и п р и го то в л е н и и о с а д к а (т. о. го то в ить о с а д о к с л е д у е т см е н ь ш и м к о л и ч е с тв о м п е с к а ). Д о б а в л я е м о е и с п ы ту е м о е в е щ е с тв о т щ а т е л ь н о и р а в н о м е р н о р а с п р е ­д е л я ю т в о с а д к е . П р и н е о б х о д и м о с ти а н а л и з и р у ю т д о п о л н и т е л ь н ы е пробы д л я о п р е д е л е н и я с т е п е н ио д н о р о д н о с ти . 8 Дизайн испытанияД и з а й н и сп ы та н и я с в я з а н с в ы бо ром к о л и ч е с т в а и д и а п а з о н а р а з н е с е н и я и сп ы ту е м ы х к о н ц е н ­т р а ц и й . к о л и ч е с т в а со суд ов д л я к а ж д о й к о н ц е н тр а ц и и и ко л и ч е с т в а л и ч и н о к н а со суд . О п и сы в аю тд и зай н ы с о п р е д е л е н и е м точ ки Е С . у с та н о в л е н и е м N O E C и о п р е д е л е н и е м д и а п а з о н а п р ед ел ь ны хко н ц е н т р а ц и й .3
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 58.1 Д и з а й н д л я р е г р е с с и о н н о г о а н а л и з а8 .1 .1 Э ф ф е кт и в н а я ко н ц е н тр а ц и я (н а п р и м е р . Е С 15, Е С М ) и д и а п а зо н ко н ц е н тр а ц и й , в которомд е й с т в и е и сп ы ту ем о го в е щ е с тв а п р ед став л я е т и н те р е с , д ол ж ны охв аты вать ко н ц е н тр а ц и и , в кл ю ч ен ­н ы е в и сп ы та ни е. В о б щ е м , точ ность и о с о б е н н о д о сто в е р н о сть , п р и которы х ус танав л и в аю тся э ф ­ф екти в н ы е к о н ц е н тр а ц и и (Е С Х). п ов ы ш аю тся, ес л и э ф ф е кти в н а я ко н ц е н тр а ц и я н ахо д и тся в д и а п а зо н еи сп ы туем ы х ко н ц е н тр а ц и й . С л е д у е т и зб ега ть э кстр а п о л я ц и и зн ач и те л ь н о н и ж е с а м о й низкой д е й с т в у ­ю щ е й ко н ц е н тр а ц и и или в ы ш е с а м о й вы сокой ко н ц е н тр а ц и и . П р е д в а р и те л ь н о е и сп ы тани е п ров о дя т вц е л я х ус та н о в л ен и я д и а п а з о н а д л я вы бо ра исп ол ь зуем ы х ко н ц е н тр а ц и й (см . 9 .1 .4 .1 ).8 .1 .2 Е сл и устанавливаю т значен и е Е С Х, то испытывают н е м е н е е пяти концентраций в трех п овторно­стях д ля каж дой кон ц ентрации. В лю бом сл уч ае используют д остаточно е количество испы туемы х ко н ц ен ­трац и й д ля установления подходящ ей модели. Ко нц ентрац и и н е должны различаться более ч е м в д ва раза(за исклю чением тех случаев, когда кривая зависим ости кон ц ентрация — э ф ф е кт и м еет пологий наклон).Количество повторностей н а каж дую обработку м ожно уменьш ить, если количество испытуемых ко н ц ен ­траций с различны м эф ф ектом является больш им . У в ел ичение количества повторностей или ум ень ш ени ед и а п а зо н а испытуемых концен тр ац и й приводит к суж ению доверительны х интервалов испытания. Еслиопределяю т вы живаемость и рост л ичинок в течени е 10 сут. то необходимы дополнительны е повторности.8 .2 Д и з а й н д л я у с т а н о в л е н и я N O E C /L O E CЕ сл и н еоб ход и м о у становить N O E C /L O E C . т о использую т пять испы туем ы х ко н ц ен тр ац и й не м е н е ечем в четы рех повторностях, и ко н ц ен тр ац и и н е дол ж ны различаться б о л е е чем в д ва раза. Количествоповторностей д о л ж н о быть д остаточны м д ля о б есп еч ени я ад екв атн ой стати сти ческой м о щ н ости д ля вы­явления разницы в р а зм е р е 2 0 % от контроля при 5 % -н о м уровне знач и м ости (р = 0 .0 5 ). Д л я о п р е д е л е ­ния скорости развития об ы чно подходит дисперси о нн ы й а н а л и з (A N O V A ), такой как кри тер и й Д а н н е ттаи критерий В ильямса [1 7 ]-{2 0 ]. Д л я определ ения показателя вы лупления используют критерий К о храна —А р м и т а ж а . точны й критерий Ф и ш е р а (с п оправкой Б о н ф ер р о н и ) и л и критерий М а н те л я — Х е н зе л я .8 .3 О п р е д е л е н и е д и а п а з о н а п р о д е л ь н ы х к о н ц е н т р а ц и йО п р е д е л е н и е д и а п а зо н а предельны х ко н ц ен тр ац и й вы полняется (одна исп ы туем ая кон ц ен тр ац и яи контроль), ес л и н икаки е э ф ф е кты н е бы ли выявлены в п ред варител ьном уста н ав л и в аю щ ем д и а п а зо ниспы тании. Ц елью о п р е д ел ен и я д и а п а зо н а пред ел ьны х ко н ц ен тр ац и й является п ров еден и е испы танияпри достаточно высокой кон ц ен тр ац и и , чтобы отв етств ен ны е исполнители могли исклю чить возможны етокси ч ески е эф ф екты в ещ ес тв а и установить пред ел ьную кон ц ен тр ац и ю , п о я в л е ни е которой н е п ред ­п ол агаю т в р еал ь ной с и туац и и . Р еко м енд уе тс я кон ц ен тр ац и я 1 0 0 0 м г/кг (сухая м а с с а ). И спользую т нем е н е е ш ести повторностей н а каж д ую о б р аб о тку и контроль. Д о л ж н а быть п о казан а ад екв атн ая с т а т и ­сти че ская м о щ н о сть д л я вы явления разницы в р а зм е р е 2 0 % от контрол я при 5 % -н о м уровне значим ости(р = 0 .0 5 ). Д л я д ан н ы х по м етр и ч ес ко м у э ф ф е кту (скорость разв и ти я и м а с с а ) уста н о в л ен и е (-критерияявляется подход ящ им стати сти чески м м етодом , ес л и д ан н ы е отвечаю т тр еб о в ан и я м д ан н о го критерия(н о р м ал ь н о е расп р ед ел ен и е , од нородность д ис пе р си и ). Е сл и ука занн ы е треб ов ан и я н е выполнены, тоиспользую т (-критерий с различны м и д исперси я м и или непарам етр и чо схи й кри терий, тако й ка к критерийВ и лко ксо и а — М а н н а — Уитни. Д л я д анны х по п оказателю вы лупления подходит точный критерий Ф и ш е р а. 9 Проведение испытания9.1 У с л о в и я и с п ы т а н и я9 .1 .1 П о д г о т о в к а с и с т е м ы о б о г а щ е н н ы й о с а д о к — в о д а9 .1 .1 .1 Д л я в н е сен и я и сп ы туем о го в е щ е с тв а использую т п р о ц е д ур у о б о га щ е н и я , оп и сан н у ю вруков о дств е О Э С Р 2 0 7 « О п р е д е л е н и е остр ой токси ч но сти д л я д о ж д ев ы х че р в ей » (1 4 ]. О б о га щ е н н ы ео с ад ки п о м е щ а ю т с я в сосуды и д о б а в л я ю т н ад о сад о ч н у ю воду с п о л уч е н и ем о б ъ ем но го со о тн о ш е н и яо с ад о к:в о д а 1 :4 (с м . 7.1 и 7 .4 ). В ы со та сл о я о с а д к а д о л ж н а н ахо д и ть ся в п р е д е л а х 1 . 5 - 3 с м . Д л я п р ед у­п р е ж д е н и я р а зд е л е н и я ко м п о н ен то в о с а д к а и р е сус п ен д и р о в ан и я м ел ки х ч а с т и ц во в р е м я д о б а в л ен и яи сп ы туем о й воды в водную колонку, о с а д о к покры ваю т пласти ко в ы м д и с ко м и воду вы ливаю т н а него,и п о сл е этого д и с к с р а з у ж е удаляю т. П о д х о д я т т а к ж е д р у ги е устр ой ств а.9 .1 .1 .2 Испытуемые сосуды покрывают, например, стеклянными пластинками. Если необходимо, то вовремя испытания уровень воды доводят до первоначального объема д ля компенсации потери воды за счет ис­парения. Д л я п редупреждения отложения солей используют дистиллированную или деионизированную воду.4
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 59 .1 .2 С т а б и л и з а ц и яП о с л е п ри готов л ен и я о б о га щ е н н о го о с а д к а с н ад о с а д о ч н о й водой т р еб уется о б е с п е ч и ть п рон и к­н о в е н и е и сп ы туем о го в е щ е с тв а из о с а д к а в водную ф а з у [3]. [4]. [6 ]. [1 3 ]. П р е д п о ч ти те л ь н о э то п роводятпри т е м п е р а т у р е и а э р а ц и и , и спол ьзуем ы х при исп ы тани и . С о о тв е тс тв у ю щ е е в рем я у р а в н о в еш и в а н и яяв л я ется с п е ц и ф и ч е с ки м д л я о с а д к а и хи м и ч еско го в е щ е с тв а и м о ж е т н ахо д и ть ся в п р е д е л а х от н е ­ско ль ки х ч а с о в д о суто к, а в редки х сл у ч а я х д о н еско л ь ки х н ед ел ь ( 4 - 5 н е д ). П о ско л ь ку з а это в рем ям о ж е т прои зой ти д е гр а д а ц и я м ногих хи м и ч ески х в ещ ес тв , т о н е о ж и д а ю т око н ч ан и я ур ав н о в еш и в а н и я ,но р е ко м е н д у е м ы й п ер и о д ур ав н о в еш и в а н и я об ы чн о с о став л я е т 4 8 ч . В ко н ц е этого д о по л н и тел ь н огоп ер и о д а у р ав н о в еш и в а н и я оп р е д ел я ю т к о н ц е н тр а ц и ю и спы туем ого в е щ е с тв а в н ад о сад о ч н о й ж и д к о ­сти . поро в ой вод е и о с а д к е по м е н ь ш е й м е р е при с а м о й вы сокой к о н ц е н тр а ц и и и п р и од ной б о л е ен изко й к о н ц е н тр а ц и и (см . 9 .3 .1 .1 ). Д а н н ы е а н а л и ти ч е с к и е и з м е р е н и я и сп ы туем о го в е щ е с тв а позволяю тр а ссч и та ть м ассовы й б а л а н с и в ы рази ть результаты н а осно в е уста н о в л ен н ы х ко н ц ен тр ац и й .9 .1 .3 В н е с е н и о т е с т о в ы х о р г а н и з м о в9 .1 .3 .1 З а 4 - 5 с у т д о в н е с е н и я тесто в ы х о р ган и зм о в в и сп ы ту ем ы е сосуды о тб и р аю т кл ад ки яи циз культур и п о м е щ а ю т в н е б о л ь ш и е сосуды с кул ьтуральной ср ед о й . И спо ль зую т в ы д е р ж а н н ую ср ед уиз и сход н ой культуры или св еж еп р и го то в л ен н у ю среду. П р и и сп ол ь зо в ани и п о сл ед н ей в кул ь тураль ­н ую с р е д у д обавл я ю т н е б о л ь ш о е ко л и че ств о ко р м а , н а п р и м е р зе л е н ы е водоросли и /и л и несколькока п е л ь ф и л ь трата м е л ко и зм ел ь чен но й сусп е н зи и хл оп ь ев и д н ого ко р м а д л я ры б (см . п р и л о ж е н и е А ).И спо ль зую т тол ь ко н ед а в н о о тл о ж е н н ы е кл ад ки яи ц . О б ы ч н о л и чи нки н ачи н аю т вы л упл яться ч е р е зп а р у с у то к п о с л е кл ад ки ( 2 - 3 с у т — Chironomus riparius при 2 0 °С , 1 - 4 сут — Chironomus tentans при2 3 °С и Chironomus yoshimatui при 2 5 ЭС ), и ро ст л и чи н о к п роисход ит в ч е ты р е с та д и и р а зв и ти я, ка ж д а яп род ол ж и тел ь н ость ю 4 - 8 сут. В и сп ы тани и использую т л и чи н о к первой стад и и ра зв и ти я ( 2 - 3 ил и 1 - 4с у т п о сл е в ы л упл ен и я ). С т а д и ю ра зв и ти я ко м ар о в о п р е д е л я ю т по ш и р и н е головной кап сул ы [6 ].9 .1 .3 .2 В каж ды й испы туемы й сосуд, с о д е р ж а щ и й о б огащ енн ы й о с а д о к и воду, произвольно вносят2 0 личинок п ервой стадии развития, используя п ипетку с тупы м кончиком. А эр ац и ю воды останавливаю т воврем я внесения личинок в испы туемы е сосуды и е щ е на 2 4 ч п осл е этого (см . 9 .1 .3.1 и 9 .1 .8 .1 ). С огл асно вы­б р ан ном у д и зай н у испы тания (см. 8 .1.2 и 8 .2 .1 ) количество используемых личинок н а каж дую концентрациюсоставляет не м о нео 6 0 д ля установления точки Е С и не м ен ее 8 0 д ля установления N O E C .9 .1 .4 И с п ы т у е м ы е к о н ц е н т р а ц и и9 .1 .4 .1 И с п ы та н и е по п одбору д и а п а з о н а ко н ц ен тр ац и й н ео б хо д и м о д л я о п р е д е л е н и я д и а п а зо н апред ел ь ны х ко н ц е н тр а ц и й в ко н еч н о м исп ы тани и . Д л я этой ц ел и использую т р я д ш и р о ко разн есе н н ы хк о н ц е н тр а ц и й и сп ы ту ем о го в е щ е с тв а . Д л я о б е с п е ч е н и я о д и на ко в о й п ло тн ости хи р о н о м и д н а п о в е р х н о ­с т и , и сп ол ь зуем ой д л я конечного и сп ы тани я , хи р он ом и д ы п од в ергаю т в оздей ств ию к а ж д о й ко н ц е н т р а ­ц и и и спы туем ого в е щ е с тв а в т е ч е н и е п ер и о д а в р е м е н и , п о зво л я ю щ его ус та н о в и ть со отв етств ую щ иеи сп ы ту ем ы е ко н ц е н тр а ц и и , и д л я этого н е т р еб уется повторн ости .9 .1 .4 .2 И с п ы туе м ы е к о н ц е н тр а ц и и д л я конечного оп ы та о п р е д е л я ю т н а о с н о в е результатов испы ­т а н и я по п одбору д и а п а з о н а ко н ц е н тр а ц и й . И спо ль зую т и вы би р аю т н е м е н е е п яти ко н ц е н тр а ц и й , како п и с а н о в 8 . 1. 1- 8 .2 .1.9 .1 .5 К о н т р о л иВ и с п ы та н и е в кл ю чаю т кон трол ь ны е сосуд ы , н е с о д е р ж а щ и е и сп ы туем о го хи м и ч еско го в е щ е с тв а ,но с о д е р ж а щ и е о с ад о к, при со о тв етств ую щ ем ко л и ч е ств е п ов торн ос те й (см . 8 .1 .2 - 8 .2 .1 ) . В том с л у ч а е ,е с л и и спол ьзован раств о р и тел ь д л я в н е сен и я и сп ы туем о го в е щ е с тв а (см . 7 .5 .1 ). с л е д у е т д о б а в и ть ко н ­трол ь н а раств о р и тел ь с о с ад ко м .9 .1 .6 Т е с т -с и с т е м аИ спо ль зую т с та т и ч е с ки е си стем ы . В и скл ю чи тел ь ны х сл у ч а я х использую тся п о л устати чес ки е илипроточны е си с тем ы с п ер и о д и че ски м ил и постоя н ны м о б н о в л е н и е м н ад о сад о ч н о й воды, н а п р и м е р ,е с л и п о казател и ка ч е с тв а воды стан о в я тся непр и год ны м и д л я тесто в о го о р га н и зм а , ил и н а р у ш а е т с ях и м и ч е с ко е р а в н о в е с и е (н а п р и м е р , уровни р а с тв о р е н н о го ки сл ор од а п ад а ю т с л и ш ко м низко, ко н ц е н ­т р а ц и я вы деленн ы х продуктов п о в ы ш а етс я с л и ш ко м вы соко ил и м и н е р а л ь н ы е в е щ е с тв а вы мы ваю тсяиз о с а д к а и влияю т на з н а ч е н и е p H и /и л и ж е с тко с т ь воды ). О д н а к о подход ят и м о гут бы ть п р е д п о ч ти ­тел ь н ы м и д р у ги е м етоды у л уч ш ен и я ка ч е с тв а н ад о с а д о ч н о й воды, т а ки е ка к а э р а ц и я .9 .1 .7 К о р мЛ и ч и н о к к о р м я т п ред по чти те л ь н о каж д ы й д е н ь ил и не м е н е е тр е х р а з в н е д е л ю . Ко рм д л я рыб (с у ­с п е н з и я в в о д е ил и м е л к о и з м е л ь ч е н н ы й к о р м , н а п р и м е р T e tr a -M in ил и T e tra -P h y ll: п о д р о б н о е о п и ­с а н и е см . в п р и л о ж е н и и А ) в ко л и ч е ств е 0 , 2 5 - 0 , 5 м г ( 0 ,3 5 - 0 ,5 м г д л я С. yoshimatui) н а л ичинку в суткияв л я ется д о статоч ны м д ля л и чи н о к р а н н е го в о зр а ста в т е ч е н и е п ерв ы х 1 0 сут. Н е м н о го б о л ь ш е кор м а5
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5тр еб уется д л я л и ч и н о к б о л е е с т а р ш е го в о зр а ста: 0 ,5 - 1 м г н а л и ч и н ку в сутки я в л я е тся д о статоч ны м д ляо с та л ь н о го п ер и о д а и сп ы тани я . Ко л и ч еств о ко р м а сн и ж аю т во всех о б р а б о т ка х и ко н тр о л е, е с л и о т м е ­чен рост грибов или в ко н тр о л е н аб л ю д а ется ги бел ь л и чи но к. Е сл и н ев о зм о ж н о о с та н о в и ть р о ст грибов,то и сп ы та н и е повторяю т зан о в о . П р и и спы тании в е щ е с тв с вы сокой ад с о р б и р у ю щ е й способн ость ю (н а ­п р и м ер , с log К ОЛ. > 5 ) ил и в ещ ес тв , ко в а л е н тн о св я зы в аю щ и хся с о с ад ко м , ко л и че ств о ко р м а, н е о б х о ­д и м о е д л я о б е с п е ч е н и я в ы ж и в аем ости и е с т е с т в е н н о го р о ста ор ган и зм о в , д о б а в л я ю т к и ску сств ен но м уос ад ку д о п ер и о д а с т а б и л и з а ц и и . Д л я этого использую т р а сти те л ь н ы й м а т е р и а л в м ес то ко р м а д ля рыб,н а п р и м е р д о б а в л я ю т 0 .5 % (с у х а я м а с с а ) м ел ко и зм ел ь чен ны х л и сть е в ж гу ч е й крапивы ( Urtica dioeca),ш ел ко в и цы (M ow s alba), кл е в е р а пол зуч его или б е л о го (Trifolium repens), ш п и н а та ( Spinacia oleracea)ил и д руго го р а сти те л ь н о го м а т е р и а л а ( Cerophyl и л и а о тф а -ц е л л ю л о за ).9 .1 .8 У с л о в и я и н к у б а ц и и9 .1 .8 .1 П р о в о д я т л е гко е а э р и р о в а н и е н ад о с а д о ч н о й воды в и сп ы туем ы х с о с у д а х п ред по чти тель н ов т е ч е н и е 2 4 ч п о сл е в н е с е н и я л и чи н о к и п р о д о л ж аю т в т е ч е н и е в сего и сп ы та ни я (с л е д у е т собл ю датьо с то р о ж н о сть в о тн о ш е н и и того , ч то ко н ц е н тр а ц и я р а с т в о р е н н о го ки сл ор од а н е д о л ж н а с н и ж ать ся н и ж е6 0 % A S V ). А э р а ц и ю п ров о дят ч е р ез сте кл я н н у ю пастеро в скую пипетку, заф и кси р о в ан н ую н а 2 - 3 смв ы ш е сл о я о с а д к а (т. е . один или н еско л ь ко п узы р ь ков /сек). В с л у ч а е исп ы тани я л етуч и х х и м и ч ески хв е щ е с тв аэ р а ц и ю си стем ы о с а д о к — вод а н е проводят.9 .1 .8 .2 И с п ы тан и е п ров о дя т при п остоянно й т е м п е р а т у р е (2 0 ± 2 ) вС . Д л я С. tentas и С. yoshimatuiр е ко м е н д ую тся те м п е р а ту р ы со о тв етств ен н о (2 3 ± 2 ) °С и (2 5 ± 2 ) °С . И спо ль зую т 1 6 -ча со в о й световойп ер и о д , и и н тен си в н о сть св е та д о л ж н а с о став л я ть о т 5 0 0 д о 1 0 0 0 лк.9 .1 .9 П р о д о л ж и т е л ь н о с т ь в о з д е й с т в и яВ о з д е й с тв и е н ач и н а е тс я с в н е сен и я л и чи н о к в о б о га щ е н н ы е и ко н трол ь ны е сосуды . М а кс и м а л ь н а яп род о л ж и тел ь н о с ть воздей ств ия с о с т а в л я е т 2 8 сут д л я С. riparis и С. yoshimatui и 6 5 сут д л я С. tentas.Е сл и ком ары вы лупляю тся р а н ь ш е , то и сп ы та н и е м о ж н о зако н ч и ть м и н и м ум ч е р е з 5 с у т посл е вылу-п л ен и я п о с л е д н е й в зрослой о с о б и в кон трол е.9 .2Н а б л ю д е н и я9 .2 .1 В ы л у п л о н и е9 .2 .1 .1 О п р е д е л я ю т в р е м я вы л упл ен и я и о б щ е е ко л и че ств о полностью вы лупивш ихся ко м ар о в(с а м ц о в и с а м о к). С а м ц о в л е гко о п р е д е л и ть по их п ер и сты м уси кам .9 .2 .1 .2 И спы туем ы е сосуды осм атриваю т не м е н е е трех раз в н ед ел ю д л я визуальной о ц енки любогоан ом ал ь н ого пов ед ени я (н ап р и м ер , выход из о с ад ка, ан о м а л ь н о е п л ав а н и е) по ср ав не ни ю с контролем .В п ери о д п ред по л а гаем о го вы лупления еж е д н е в н о подсчиты ваю т количество вы лупивш ихся ком аров.Каж ды й д ен ь оп редел яю т пол и кол ичество полностью вы лупивш ихся ком аро в . П о сл е и д е нти ф и кац и иком аро в и звл екаю т из сосудов. Р еги стри р ую т л ю бы е кл ад ки яиц. о с та ю щ и е с я д о о ко нчан и я испы тания, азатем их удаляю т д л я п р ед уп р еж д ен и я повторного в н есен и я л и чи но к в осад ок. Т а к ж е р егистрирую т числовидим ы х н евы лупивш ихся куколок. Руководство по о п ред ел ен и ю вы лупления п ри в ед ено в п ри л о ж ен и и Г.9 .2 .2 Р о с т и в ы ж и в а е м о с т ьЕ сл и п ред став л яю т д а н н ы е по в ы ж и в аем ости и р о сту л и ч и н о к за п ерв ы е 1 0 сут. т о в н а ч а л е и сп ы ­та н и я в о б щ е е ч и с л о и сп ы туем ы х со суд ов в кл ю чаю т д о п о л н и тел ь н ы е сосуды , чтобы их м о ж н о б ы л о и с ­пользовать в д а л ь н е й ш е м . О с а д о к и з э ти х д опо л н и тел ь н ы х с о суд ов п р о с еи в аю т ч е р е з с и то с р а зм е р о мо тв ер сти й 2 5 0 м км . которое з а д е р ж и в а е т л и чи нки . П о к а з а т е л я м и гибели л и ч и н о к яв л я ется н е п о д в и ж ­н ость и о тсу тс тв и е р е а кц и и н а м е х а н и ч е с ко е р а з д р а ж е н и е . Т а к ж е подсчиты ваю т ко л и че ств о ли чи но к,которы х н е уд ал о сь о б н а р уж и ть , и их о тн о ся т к м ер твы м (л и чи н ки , кото ры е погибли в н а ч а л е и с п ы та ­ния. м о гли п одв ергнуть ся м и кр о б н о м у р а зл о ж е н и ю ). О п р е д е л я ю т (б еззо л ь н ую ) сухую м а с с у вы жив­ш и х л и чи н о к н а испы туем ы й со суд и р а ссч и ты в аю т ср ед н ю ю и нд и в и д уал ь н ую сухую м ас су н а сосуд.Р еко м е н д у е тс я о п р е д ел и ть в озра ст в ы ж ивш их л и чи но к; д л я э то го и зм ер я ю т ш и р и н у головной капсулыу ка ж д о й осо б и .9 .3 А н а л и т и ч е с к и е о п р е д е л е н и я9 .3 .1 К о н ц е н т р а ц и я и с п ы т у е м о г о в е щ е с т в а9 .3 .1 .1 П е р е д н а ч а л о м и сп ы та ни я (т. е . п е р е д в н е с е н и е м л и ч и н о к) о тб и р аю т пробы о б ъ ем но гоо с а д к а н е м е н е е ч е м из од но го о б р а б о т а н н о го со суд а д л я ан а л и ти ч е с ко го о п р е д е л е н и я ко н ц ен тр ац и ии сп ы туем о го в е щ е с тв а в о с а д ке . В н а ч а л е исп ы тани я ан а л и зи р у ю т как м и н и м ум пробы н ад о сад о ч н о йводы, поровой воды и о с а д к а (с м . 9 .1 .2 ), а в ко н ц е исп ы тани я а н а л и зу п о д в е р га ю т у ка за н н ы е пробытолько при с а м о й вы сокой к о н ц е н тр а ц и и и при од но й б о л е е низкой ко н ц е н тр а ц и и . Р езультаты оп ред е- 6
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5л е н и я к о н ц е н тр а ц и и и спы туем ого в е щ е с тв а п р ед о став л я ю т и н ф о р м ац и ю о п о в е д е н и и /р а с п р е д е л е н и ии сп ы туем о го в е щ е с тв а в си с те м е вод а — о сад ок.9 .3 .1 .2 П р и п ров е д ен и и п р о м еж уто ч н ы х и з м е р е н и й (н а п р и м е р , на 7 -е с у т) и ес л и д л я а н а л и з атреб ую тся б о л ь ш и е пробы , кото ры е н ев о зм о ж н о о то б р ать из и сп ы туем ы х сосудов, н е н ар у ш и в т е с т -си стем у. а н а л и ти ч е с к и е и з м е р е н и я п ров о дят н а п роб ах из д о п о л н и тел ь н ы х и сп ы туем ы х сосудов, п од ­го то в лен ны х ан а л о ги ч н ы м о б р а з о м (в кл ю чая п ри сутств и е тесто в ы х о р га н и зм о в ), но н е исп ол ь зуем ы хд л я б и о л о ги чес ки х н аб л ю д е ни й .9 .3 .1 .3 Д л я в ы д е л е н и я поровой воды р е ко м е н д у е тс я п роводить ц ен тр и ф у ги р о в ан и е , н а п р и м е рпри 1 0 0 0 0 g и 4 “С в т е ч е н и е 3 0 м и н . О д н а к о е с л и и сп ы ту ем о е в ещ ес тв о н е а д с о р б и р у е тс я н а ф и ль трах,т о д о п у сти м о ф и л ь тр о в ан и е . В н екотор ы х с л у ч а я х н ев о зм о ж н о о п р е д е л и ть к о н ц е н тр а ц и ю и спы туем о гов е щ е с тв а в поровой в од е, поско ль ку р а з м е р пробы яв л я ется с л и ш ко м м ал ен ь ки м .9 .3 .2 Ф и з и к о -х и м и ч е с к и е п о к а з а т е л иИ зм е р я ю т p H и те м п е р а ту р у исп ы туем ы х со суд ов со о тв етств ую щ и м о б р а з о м (см . 6 ). В н а ч а л е ико н ц е и сп ы та ни я о п р е д е л я ю т ж е с тко с т ь воды и с о д е р ж а н и е а м м и а к а в контрольны х со с у д а х и в одноми сп ы ту ем о м со суд е с с а м о й вы сокой к о н ц е н тр а ц и е й . 10 Данные и отчет о проведении испытания1 0 .1 О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в1 0 .1 .1 Ц е л ь ю д а н н о го и сп ы та ни я яв л я ется о п р е д е л е н и е вл ияния и сп ы туем о го в ещ ес тв а н а ско­рость ра зв и ти я и о б щ е е чи сл о полностью вы л упи в ш ихся ком аро в (с а м ц о в и с а м о к) и л и . в с л у ч а е п р ов ед ен и я и сп ы та ни я по о ц е н к е э ф ф е к т а в т е ч е н и е 1 0 сут. — н а в ы ж и в аем ость и м а с с у л и чи но к. Е сл и о т ­сутств ую т св е д ен и я о стати сти че ски д о сто в е р н о й разл и чн о й пол овой чув ств ител ь но сти , то результатыпо с а м ц а м и с а м ка м об ъ еди няю т д л я стати сти ч е ско го а н а л и з а . Р а з л и ч и я в п ол овой чувствител ьностим о ж н о о п р е д е л и ть с тати сти ч е ски , н а п р и м е р в т а б л и ц е и сп ы та ни я ■/} - г - 2 . П р и н е о б хо д и м о с ти ч е р е з1 0 сут оп р е д ел я ю т в ы ж и в аем ость л и ч и н о к и ср ед ню ю и нд и в и д у ал ь н ую сухую м а с с у на од ин сосуд.1 0 .1 .2 Э ф ф е кт и в н ы е ко н ц е н тр а ц и и , в ы р а ж ен н ы е по сухой м а с с е , п ред по чти те л ь н о рассчиты ватьна осно в е уста н о в л ен н ы х к о н ц е н тр а ц и й в о с а д ке в н а ч а л е и сп ы та ни я (см . 9 .3 .1 .1 ).1 0 .1 .3 Д л я р а с ч е та точки Е С 50 ил и д руго й Е С Х исп ол ь зую т стати сти ку н а со суд в ка ч е с тв е ф а к т и ­ч е с ки х п о в то р н о с те й . П р и р а сч е те д о в ер и тел ь н о го и н т е р в а л а д л я л ю бой Е С Х учи ты в аю т в а р и а б е л ь ­н ость м е ж д у со суд ам и , ил и е ю м о ж н о п р ен еб р еч ь , ес л и д о к а з а н о , ч то э та в ар и аб ел ь н о сть являетсян езн ач и те л ь н о й . П р и о п р е д е л е н и и м о д ел и м ето д о м н а и м е н ь ш и х кв ад рато в п ров о дят п р е о б р а зо в а н и е вст а т и с т и ку на со суд д л я п ов ы ш е ни я о д но ро д н ости д и с п е р с и и . З н ач ен и я Е С Х р а ссч и ты в аю т п о сл е п р е ­о б р а з о в а н и е э ф ф е к т а в и сход н ое зн ач ен и е.1 0 .1 .4 Е сл и стати сти ч е ски й а н а л и з осно в ан на о п р е д е л е н и и N O E C /L O E C п у те м пров ерки ги п о­тезы . т о с л е д у е т учиты вать в ар и а б е л ь н о с ть м е ж д у со суд ам и , н а п р и м е р « и е р а р х и ч е с ки м » A N O V A .А л ь тер н а ти в н о п о д х о д я щ и м и являю тся б о л е е ош и б ко у сто й ч и в ы е кр и тер и и [2 1] в те х си т у а ц и я х , когдаи м ею тся н а р у ш е н и я обы чны х п р ед п о л о ж ен и й A N O V A .1 0 .1 .5 П о к а з а т е л ь в ы л у п л е н и я1 0 .1 .5 .1П о ка з а т е л и вы л упл ен и я являю тся д и с кр е тн ы м и д а н н ы м и , и их м о ж н о ан ал и зи р о в ать сп о м о щ ь ю кри тер и я К о х р а н а — А р м и т а ж а . п р и м ен ен н о го п о ш а го в о , гд е п р е д п о л а га е т с я м о н о то н н аяз а в и си м о сть «ко н ц е н т р а ц и я — э ф ф е к т» , и эти д а н н ы е с о в п а д а ю т с э ти м п р е д п о л о ж е н и е м . В п р о ти в ­н ом с л у ч а е и с п о л ь зу ю т то ч н ы й к р и т е р и й Ф и ш е р а и л и кр и т е р и й М е н т е л я — Х е н з е л я с п о п р а в ко йБ о н ф е р р о н и — Х о л м а p-з н а ч е н и й . Е сл и и м ее тс я д о казател ь ств о б о л ь ш о й в а р и аб ел ь н о сти м е ж д у по­в то р н о с тя м и в од но й и той ж е ко н ц е н тр а ц и и , ч то ука зы в а ет на б и н о м и н а л ь н о е р а с п р е д е л е н и е (ч астоотн о си тся к «э кс тр а б и н о м и и а л ь н о й » в ар и а ц и и ), т о тогд а использую т ро бастн ы й кр и тер и й К о х р а н а —А р м и т а ж а и точны й кр и тер и й Ф и ш е р а , н а п р и м е р , п р ед л о ж ен н ы й в [21].О п р ед ел я ю т с ум м ар но е кол ичество вы лупивш ихся к ом аро в н а со суд л . и д ел я т н а ч и сл о внесенны хл и ч и н о к л ,Е Я = ^ ,( 1)п'»гд е ER — п о ка за те л ь вы л упл ен ия.лв — ч и с л о вы л упивш ихся ко м ар о в н а сосуд:п3 — чи сло внесенны х л и чи но к на сосуд.7
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 51 0 .1 .5 .2 А л ь тер на ти в о й , кото рая н а и б о л е е п одход и т д л я бо л ь ш и х вы борок п роб при н а л и ч и и экс-т р а б и н о м и н а л ь н о й д и с п е р с и и , яв л я ется о б р аб о тка п о ка з а т е л я вы л упл ен и я в в и д е п остоянно го э ф ф е к ­т а и и сп о л ь зо в ани е т а ки х м ето дов , к а к кр и те р и й В и л ь я м са, е с л и п р ед п о л а гается м о н о то н н ая з а в и с и ­м о сть ко н ц е н тр а ц и я — э ф ф е к т и с о в п а д а е т с д а н н ы м и ER. П р и о тсутствии м о н о то н н о сти подход иткр и тер и й Д а н н е т а . Б о л ь ш ая вы бо рка проб о з н а ч а е т в д а н н о м с л у ч а е кол и честв о вы л упи в ш ихся л и ч и ­н о к и кол и честв о н ев ы л упи в ш и хся л и ч и н о к в о б о и х сл у ч а я х в б о л е е пяти п о в торн остя х (со су д ах ).1 0 .1 .5 .3 Д л я п р и м ен ен и я методов A N O V A знач ен и я Е Я в н а ч а л е подвергаю т п рео бразо в ани ю «а р кс и ­н ус — квадратны й корень» или прео бразо в ани ю по м ето ду Тью ки — Ф р и м а н а д ля получения примерногон орм ального ра сп р ед ел ен и я и урав ни в ани я д исперси й . П р и использовании абсолю тны х ч а сто т п р и м е н я ­ю т критерий К о хр а н а — А р м и т а ж а . точны й кри тер и й Ф и ш е р а или М е н те л я — Х е н зе л я . П р ео б р а зо в ан и е«ар кси н ус — квадратны й кор ен ь » рассчиты ваю т ка к ар кси н ус {синус 1) о т кв ад ратного корня ER.10 .1.5.4 Д ля показателей вылупления рассчитывают значения Е С Х, используя регрессионный анализ(или например, пробит [22]. логит, анал и з Вейбулла. подходящ ее программ ное обеспечение и т. п.). При н е ­возможности п рименения регрессионного а н ал и за (наприм ер, при наличии м ен ее двух частичны х эф ф ектов)используют другие неларам етричесхие методы, такие как скользящ ее сред нее или простая интерполяция.1 0 .1 .6 С к о р о с т ь р а з в и т и я10 .1 .6 .1 С р е д н е е в рем я разв и ти я п ред став л яет со бой сред ний в рем ен но й и нтер в ал м еж д у в н е с е ­н и е м личинок (сутки 0 и спы тания) и в ы л упл ением опы тной группы ком аров. Д л я расчета ф акти ческогов р е м ен и разв и ти я учиты ваю т возраст л и чи но к на в рем я внесен и я. С кор ость развития является обратнойвеличиной в рем ен и разв и ти я (еди н иц а: 1/с у т ) и п ред став л яет скорость разв и ти я личинки, кото рое и м е ­ет м есто в сутки. С кор ость разв и ти я пред почтительна д ля о ц енки д анн ы х испы таний по токсичности сосад ком , поскольку его д и с п е р си я н и ж е и д а н н ы е являю тся б о л е е однородны м и и б л и ж е к н о р м ал ь н ом урасп р ед ел ен и ю по ср ав не ни ю со в р е м ен ем разв и ти я. С ле д о в ател ь н о , д л я о ц енки скорости разв и ти я и с ­пользую т м о щ н ы е п ар а м етр и ч е ски е критерии, но не д л я в р е м ен и развития. Д л я скорости развития в видепостоянного э ф ф е к та знач ен и я Е С х устанав л и в аю т с использованием р е гр е сси он н ого а н а л и за (23), (24).1 0 .1 .6 .2 Д л я с л е д у ю щ и х с тати сти ч е ски х т е с т о в ко л и че ств о ком ар о в , н а б л ю д а е м о е при и спы таниина сутки х. п р и н и м а ю т за ко л и ч е ств о вы л упи в ш ихся ко м ар о в н а ср ед ни й в р е м е н н о й и н т е р в а л м е ж д ус у тка м и х и с у тка м и х - / ( / = д л и н а и н те р в а л а м е ж д у о п р е д е л е н и я м и , об ы чн о 1 с у т). С р е д н ю ю скоростьра зв и ти я на сосуд, х . р а ссч и ты в аю т по ф ор м ул еЬх>х * Z /T) 1-1 (2)п е 'где: х — с р ед н я я скорость ра зв и ти я н а сосуд;i — интер в ал м еж д у оп редел ен и ям и ;т — м акси м ал ь но е чи сло и нтер в ал ов м еж д у определ ениям и;/( — ч и с л о вы л упи в ш ихся н асеко м ы х в и н те р в а л е м е ж д у о п р е д е л е н и я м и г.пе — о б щ е е количество вы лупивш ихся н асеком ы х в кон ц е испы тания (= £ /');х — ско ро сть ра зв и ти я вы лупивш ихся н асеко м ы х в и н т е р в а л е м еж д у о п р е д е л е н и я м и /.(3 )где: сут, — сутки о п р е д е л е н и я (сутки п о с л е внесен ия);— д л и н а и н т е р в а л а м еж д у о п р е д е л е н и я м и i (сут. об ы чно 1 су т).1 0 .2О т ч е т о п р о в е д е н и и и с п ы т а н и яО т ч е т о п р о в е д ен и и и сп ы та ни я д о л ж е н с о д е р ж а т ь с л е д ую щ ую и нф о рм ац и ю :1 0 .2 .1 И с п ы ту е м о е в ещ ес тв о :- ф и зи ч е с ка я п р и ро д а и при н ео б хо д и м о с ти ф и зи ко -х и м и ч е с ки е св о й ства (р аств о р и м о сть в воде,д а в л е н и е п ар а , ко э ф ф и ц и е н т р а с п р е д е л е н и я в почве (и л и в о с а д к е , ес л и т а ки е д а н н ы е и м е ю тс я ), с т а ­би л ь но сть в воде и т. п.);- д а н н ы е по х и м и ч е с к о й и д е н т и ф и к а ц и и (о б щ е е н а з в а н и е , с т р у к ту р н а я ф о р м у л а , н о м е р C A Sи т. п .), вклю чая чи с то ту и а н а л и ти ч е с ки й м ето д ко л и че ств ен н о го о п р е д е л е н и я и сп ы туем о го в ещ ес тв а.1 0 .2 .2 В и д т есто в о го о р ган и зм а :- и спол ьзуем ы е тестов ы е организмы : вид. н ауч н о е н азв а ни е, источник о р ган и зм о в и условия куль­тивирования, 8
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5- и н ф о р м а ц и я по о б р а щ е н и ю с к л а д к а м и я и ц и л и чи нкам и ;- в озраст тестов ы х о р ган и зм о в при в не сен и и в и с п ы ту ем ы е сосуды.1 0 .2 .3 У сл о в и я испы тания:- и сп ол ь зуем ы й о с ад о к, т. е . п риродны й ил и искусств ен ны й осадок;- д л я при ро дн ого о с а д ка : источни к и о п и с а н и е м е с та о т б о р а п роб о с а д к а , в кл ю чая по в о зм о ж н о ­с т и и стор и ю загр я зн е н и я ; х а р актер и сти ки : p H . с о д е р ж а н и е о р ган и ч ес ко го у гл е р о д а , с о о т н о ш е н и е C /N игр ан у л о м етр и я (п р и н еоб ход и м ости );- п р и го то в л ен и е искусств ен но го о с а д к а , ко м по нен ты и х а р а кте р и с ти ки (с о д е р ж а н и е о р га н и ч е с ко ­го угл ер о д а, p H . в л аж но сть и т. п. в н а ч а л е и сп ы тани я);- п одготов ка и сп ы туем о й воды (е с л и использую т в о с стан о в л е н н ую воду) и х а р а кте р и с ти ки (к о н ­ц е н тр а ц и я ки сл о р о д а. pH . пров о ди м о сть , ж е с тко с т ь и т. п. в н а ч а л е и сп ы тани я);- в ы со та слоя о с а д к а и м ад осад очн ой воды;- об ъ ем н ад о сад о ч и о й воды и поро в ой воды; м а с с а в л аж но го о с а д к а с и б е з поровой воды;- и с п ы ту ем ы е сосуды (м а те р и а л и ра зм е р);- м ето д п ри готов л ен и я стоковы х раств о р о в и и сп ы туем ы х ко н ц ен тр ац и й ;- в н е с е н и е и сп ы туем о го в ещ ес тв а: и сп ол ь зуем ы е и с п ы ту ем ы е к о н ц е н тр а ц и и , ко л и че ств о п ов тор­н о с те й и п р и м е н е н и е ра ств о р и тел я (п ри н еоб ход и м ости );- усло в ия и нкуб ац и и : т е м п е р а ту р а , световой ц икл и и нтен си в н ость , а э р а ц и я (ч а с т о т а и и н те н с и в ­ность):- п о д р о б н а я и н ф о р м а ц и я о ко р м л ен и и , в кл ю чая тип ко р м а, е го подготовку, ко л и че ств о и ре ж и мко р м л ен и я .1 0 .2 .4 Результаты :- н о м и н ал ь н ы е и сп ы ту ем ы е ко н ц е н тр а ц и и , у с та н о в л ен н ы е и сп ы ту ем ы е ко н ц ен тр ац и и и резуль ­таты всех а н а л и зо в по о п р е д ел ен и ю к о н ц е н тр а ц и и и сп ы туем о го в е щ е с тв а в и сп ы ту ем о м сосуде;- ка ч е с тв о воды в и сп ы туем ы х со суд ах, т. е . p H . т е м п е р а ту р а , с о д е р ж а н и е р а с т в о р е н н о го ки сл о ­ро д а. ж е с тко с т ь и ур о в ен ь а м м и а к а :- в о з м е щ е н и е и сп а р и в ш е й с я и сп ы ту ем о й воды, ес л и э то и м е л о место;- ко л и че ств о вы л упи в ш ихся ком аро в (с а м ц о в и с а м о к) н а со суд и в сутки;- ко л и че ств о л и чи н о к н ев ы л упи в ш и хся в ком аро в н а сосуд;- ср ед няя инд и в и дуаль н ая сухая м ас са л и чи но к на сосуд и на стад и ю разв и ти я (при н еоб ход и м о­сти):- п р о ц е н т вы л упл ен и я на п овторность и и сп ы ту ем ая ко н ц е н тр а ц и я (с у м м а р н о е кол и честв о с а м ­цов и с а м о к н асеко м ы х);- с р ед н я я ско ро сть ра зв и ти я пол ность ю в ы л упивш ихся ко м ар о в на п овторность и каж д ую о б р а ­б о тку (о б ъ ед и н ен н о е ко л и че ств о ко м ар о в (с ам ц о в и са м о к));- з н а ч е н и я то кси ч ески х кон ечны х т о ч ек, н а п р и м е р Е С Х (и со о тв етств ую щ и е д о в ер и тел ь н ы е и н т е р ­в ал ы ). N O E C и /и л и L O E C , с т а ти с ти ч е с ки е м ето ды , исп ол ь зо в анн ы е д л я их о п р е д ел ен и я ;- о б с у ж д е н и е результатов, вклю чая л ю б о е в л и я н и е на результаты и сп ы тани я , в о з н и ка ю щ е е зас ч е т о ткл о н е н и й от н а с то я щ е го с тан д а р та. 9
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П рилож ение А(реком ендуем ое)Реком ендации п о культивированию Chironomus riparius1 Личинки Chironomus культивируют в кристаллизационных чашках или более крупных контейнерах. Мелкийкварцевый песок распределяют слоем высотой примерно 5 - 1 0 см над дном контейнера. Было показано, чтокизельгур (например. Merck. Art 81 1 7 ) является подходящим субстратом (достаточным является более тонкийслой в несколько мм). Затем добавляют соответствующую требованиям воду на высоту несколько см. Уровеньводы пополняют при необходимости для восстановления потерь в результате испарения и предупреждения вы­сыхания. Воду заменяют при необходимости. Проводят легкую аэрацию. Сосуды с культивируемыми личинкаминаходятся в подходящей камере, которая будет предупреждать вылет вылупившихся взрослых особей. Камерадолжна быть достаточно большой, чтобы обеспечить роение вылупившихся взрослых особей, иначе не будет про­исходить копуляция (минимальный размер составляет примерно 30 * 30 * 30 см).2 Камеры находятся при комнатной температуре или при постоянной температуре окружающей среды(20 ± 2 ) *С со световым периодом 16 ч свет (интенсивность примерно 1000 лк). 8 ч — темнота. Имеются данные,что влажность воздуха менее 60 % относительной влажности может тормозить репродукцию.Вода для разведения3 Используют любую соответствующую требованиям природную или искусственную воду. Обычно использу­ют колодезную воду, дехлорированную водопроводную воду и искусственные среды (например, среда Elendt «М 4»или «М 7», см. ниже). Перед применением воду аэрируют. При необходимости культуральную воду обновляют, осто­ рожно сливая или откачивая использованную воду из сосудов для культивирования, не нарушая трубочек личинок.Кормление личинок4 Личинок Chironomus кормят хлопьевидным кормом для рыб (Tetra Min®. Telra Phylf8' или кормом для рыбдругой аналогичной марки) из расчета примерно 25 0 мг на сосуд в сутки. Корм вносят в виде сухого размельчен­ного порошка или в виде суспензии в воде: 1.0 г хлопьевидного корма добавляют к 20 мл воды для разведения иперемешивают для получения однородной смеси. Такую суспензию скармливают из расчета 5 мл на сосуд в сутки(перед использованием встряхивают). Личинки более старшего возраста получают большее количество корма.5 Кормление корректируют в зависимости от качества воды. Если культуральная среда становится «мутной»,то количество вносимого корма уменьшают. Добавление корма тщательно контролируют. Слишком малое количе­ство корма будет вызывать переселение личинок по водной колонке, а слишком большое количество корма будетвызывать повышенную микробиологическую активность и снижение концентрации кислорода. Оба фактора могутприводить к пониженным скоростям роста.6 При закладке новых сосудов для культивирования также можно добавлять некоторые зеленые водоросли(например. Scenedesmus subspicatus, Chloreila vulgaris).Кормление вылупившихся взрослых особей 7 Некоторые экспериментаторы предложили использовать ватные палочки, пропитанные насыщенным рас­твором сахарозы, служащие в качестве корма для вылупившихся взрослых особей.Вылуплемие8 При температуре (20 ± 2) "С взрослые особи начинают вылупляться в сосудах с культивируемыми личин­ками примерно через 1 3 -1 5 сут. Самцов легко отличить по перистым усикам.Кладки яиц9 После появления взрослых особей внутри камеры для культивирования все сосуды для культивированияличинок тщательно осматривают три раза в неделю на отложение студенистых кладок яиц. Если они присутствуют,то кладку яиц осторожно удаляют. Ее переносят в небольшую чашку, содержащую пробу воды для культивирова­ ния. Кладку яиц используют для закладки нового сосуда для культивирования (например. 2 - 4 кладки яиц/сосуд)или используют для испытания токсичности.10 Личинки первой стадии развития вылупляются через 2 - 3 сут.Закладка новых культуральных сосудов11 После получения культур закладывают новые сосуды для культивирования личинок каждую неделю илиреже в зависимости от требований испытания, удаляя более старые сосуды после вылупления взрослых комаров.Используя такую систему, можно получить регулярную продукцию взрослых особей при минимальных усилиях.Получение испытуемых растворов «М 4» и «М 7»12 Elendt (1990) описал среду «М 4». Среду «М 7» готовят, как и среду «М 4», за исключением веществ, при­веденных в таблице А .1. концентрации которых в четыре раза ниже в среде «М 7». чем в среде «М 4». В литературеописано приготовление среды «М 7» (Eiendt. персональное сообщение). Испытуемый раствор не следует готовитьв соответствии с Elendt и Bias (1990) для концентраций N a S i0 3 • 5 Н 20 . N a N O j. К Н 2Р 0 4 и К 2Н Р 0 4, которые не под­ходят для приготовления стоковых растворов.10
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Приготовление среды «М7»13Каждый стоковый раствор (I) готовят по отдельности, и объединенный стоковый раствор (II) получаютиз данных стоковых растворов I (см. таблицу А .1). 50 мл объединенного стокового раствора (II) и определенноеколичество каждого стокового раствора макроэлементов, приведенных в таблице А.2. доводят до 1 л деионизиро­ ванной водой с получением среды «М 7». Стоковый раствор витаминов готовят добавлением трех витаминов к д еи ­онизированной воде, как показано в таблице А.З, и 0.1 мл объединенного стокового раствора витаминов добавляютк конечной среде «М 7» непосредственно перед применением (стоковый раствор витаминов хранят замороженнымнебольшими порциями). Среду аэрируют и стабилизируют.Б и б л и о г р а ф и я1 ВВА (1 995). Long-term toxicity test with Chironomvs riparius: Development and validation o f a new test system.Ed. by M. Streloke and H. Kopp. Berlin, 1995.Т а б л и ц а A.1 — Стоковые растворы микроэлементов для среды М 4 и М 7Для получения объединенногостокового раствора (II)Количество,смешивают следующиеКонечная концентрациядоведенноеколичества стоковогов испытуемых растворах.до 1 nСтоповые растворы (I)раствора (1) и доводят до 1 лмгТлдеионизиродеионизированной водой,ванной водой,МПыг М4 М 7 М 4 М7Н3ВО31)571901.00.252.860.715МпС12 - 4 Н20 '>72101.00.250.3610.090U C I 1>61201.00.250.3060.077R bC I1»14201.00.250.0710.018S rC lj - 6 Н20 * 130401.00.250.1520.038N aB r1>3201.00.250.0160.004N a 2M c 0 4 • 2Н 20 1>12601.00.250.0630.016CuCI2 - 2Н 20 ^3351.00.250.0170.004ZnCI22601.01.00.0130.013CoCIa 6H 202001.01.00,0100.010Kl651.01.00.00330.0033N a 2S e 0 343.81.01.00.0220.0022NH4Vo311.51.01.00.000580.000058N a 23 flT A гН ^ О ’ )2»500020 .05.02.50.625F e S 0 4 • 7H 2OVI2)199120.05.01.00.2491> Данные вещества различаются в М4 и М7, как указывалось выше.2> Данные растворы готовят по отдельности, затем сливают вместе и сразу же автоклавируют.Т а б л и ц а А .2 — Стоковые растворы макроэлементов для среды М 4 и М 7Количество стоковых растворовКонечнаяКоличество, доведенноемакроэлемента, добавленное дляконцентрациядо 1 л деионизированнойприготовления среды М4 и М7.в испытуемыхводой, мгмл/лрастворах, мг/лСаС12 - 2 Н202938001.0293.8M g S 0 4 • 2 Н202466000.5123.3KCI580000.15.8N a H C 0 3648001.064.8N a S t0 3 • 9 Н20500000,210.0N a N 0 327400,10.274к н 2р о 414300.10.143к 2н р о 418400.10.184 11
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Т а б л и ц а А.З — Стоковые растворы витаминов для среды М 4 и М7 К о л и ч е с т в о с то ко в ы х р а с т в о ­ К о л и ч е с т в о , д о в е д е н н о е р о в в и та м и н о в , д о б а в л е н н о е К о н е ч н а я ко н ц е н т р а ­ д о 1 л д е и о н и з и р о в а н н о й для п р и го то в л е н и и сред ы ция в и сп ы туе м ы х во д о й , и г М 4 и М 7 , р а с т в о р а х , м г/л м л/лТиамин гидрохлорид7500.10.075Цианокобаламин (В 12)100.10.0010Биотин7.50.10.00075Б и б л и о г р а ф и яElendt В .Р (1990): selenium deficiency in Crustacean. Protoplasma. 154. 2 5 -3 3 . Elendt B.P. & W .-R. Bias (1990): trace nutrient deficiency in Daphnia magna cultured in standard medium for toxicitytesting. Effects on the optimization of culture conditions on life history parameters of D. magna. W ater Research 24(9).1157-1167. 12
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П риложение Б(реком ендуем ое)П р и г о т о в л е н и е и с к у с с т в е н н о г о о с а д к аС остав осадкаСостав искусственного осадка должен быть следующим: П роц е нт от сухой С о с та в л я ю щ и й ко м п о н е н т Х а р а кте р и с т и ка м а с с ы о с а д каТорф сфагнум. pH максимально близко к 5 .5 -6 .0 ; без видимыхТорфрастительных остатков, мелко измельченный (размер частиц s 14 - 5мм) и высушенный на воздухеКварцевый песокРазмер частиц: > 50 % частиц должно быть в диапазоне 5 0 -2 0 0 мкм7 5 -7 6Каолиновая глинаСодержание каолинита 2 30%20Органический углеродДоведенный добавлением торфа и песка(2 ± 0.5)Карбонат кальцияС а С 0 3, измельченный, химически чистый0 .0 5 -0 .1ВодаПроводимость S 10 mkCj'cm3 0 -5 0П риготовлениеТорф высушивают на воздухе и измельчают до мелкого порошка. Готовят суспензию необходимого коли­чества торфяного порошка в деионизированной воде с использованием высокоэффективного устройства для го­могенизация. pH данной суспензии доводят С а С О э д о (5 .5 ± 0 .5 ). Суспензию кондиционируют в течение нем ен ее 2 сут при осторожном перемешивании при (20 ± 2 ) 'С для стабилизации pH и установления стабильногомикробного компонента. Вновь измеряют pH. его значение должно составлять (6.0 ± 0.5). Затем торфяную суспен­ зию перемешивают с другими составляющими компонентами (песком и каолиновой глиной) и деионизированнойводой для получения однородного осадка с содержанием воды в диапазоне от 30 % до 50 % сухой массы осадка.Вновь определяют pH конечной смеси и при необходимости доводят С а С 0 3 до 6 .5 -7 .5 . Отбирают пробы осадкадля определения сухой массы и содержания органического углерода. Затем перед использованием в испытаниитоксичности для хирономид рекомендуют кондиционировать искусственный осадок в течение 7 сут в условиях,аналогичных последующему испытанию.ХранениеСухие компоненты для приготовления искусственного осадка хранят в сухом и прохладном месте при ком­натной температуре. Искусственный (влажный) осадок не следует хранить до его использования в испытании.Осадок используют сразу ж е после 7 сут кондиционирования, когда заканчивается его подготовка.Б и б л и о г р а ф и яO E C D Guidline 20 7. (1 984). Earthworm, Acute toxicity Test. Metier M.. P. Egeler. J. Rombke. H. SchaJInass. R. Nagel and B. Streit. (1 998). Short-term toxicity of lindane,hexachlorobenzene and copper sulfate on tubifrad sludgeworms (oligochaeta) in artificial media. Ecotox. and Environ.Safety. 39 . 1 0 -2 0 .13
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П рилож ение В(реком ендуем ое)Х и м и ч е с к и е х а р а к т е р и с т и к и п р и е м л е м о й в о д ы ,п р е д н а з н а ч е н н о й д л я р а з в е д е н и яВеществоКонцентрацияВешество в виде частиц< 20 МГ/ЛОбщ ее содержание органического углерода< 2 мг/лНеионизированный аммиак< 1 мкг/лЖесткость в виде С аС О э< 4 0 0 мг/л*Остаточный хлор< 10 мкг/лОбщ ее содержание фосфорорганичвских пестицидов< 50 нг/лО бщ ее содержание хлорорганических пестицидов< 50 нг/лплюс полихлорированных бифениловОбщий органический хлор< 2 5 нг/лОднако необходимо отметить, что если предполагается наличие взаимодействия между ионами жестко­сти и испытуемым веществом, то используют воду с более низкой жесткостью (и. таким образом, в такой ситуа­ции не используют среду Elendt М 4).14
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П риложение Г(реком ендуем ое)Р у к о в о д с т в о д л я м о н и т о р и н г а в ы л у п л я е м о с т и л и ч и н о к х и р о н о м и дЛовушки для вылупления помещают в испытуемые сосуды. Эти ловушки необходимы начиная с 20-х сут доконца испытания. Пример ловушки приведен на рисунке Г.1: А — н е й л о н о в а я с е т ка ; Б — п е р е в е р н у та я п л а с ти ко в а я ч а ш ка ; В — б е з л о п а с тн о й с та ка н д л я во зд ей ств ия ; Г — си то вы е о т в е р сти я д л я о б м е н а воды ; Д - вода; Е — о с а д о кРисунок Г. 1 — Ловушки для вылупления личинок хирономид15
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П рилож ение Д А(справочное)С р а в н е н и е с т р у к т у р ы м е ж д у н а р о д н о г о д о к у м е н т ас о с т р у к т у р о й н а с т о я щ е г о с т а н д а р т аТ а б л и ц а Д А . 1 С т р у кт у р а н а с т о я щ е ю ста нд а рта С т р у кт у р а м е ж д у н а р о д н о ю д о ку м е н та Разделы П одр азде лы П е р е чи сл е н и я Разделы П е р е чи сл е н и яВведение1 . 2 . 3 . 4 . 5. 61122.1Приложение 12.2Приложение 12.3Приложение 12.4Приложение 137485961077.1117.2127.3 а абЬ7.3.1в13с г dДе7.3.2147.4157.5168178.18 . 1.1188 .1.2198.2208.32199.19.1.116
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Продолжение таблицы ДА. 1 С т р у к т у р а н а сто я щ е го с та н д а р та С т р у кт у р а м е ж д у н а р о д н о го д о ку м е н та Р а здел ы П од р а зд е л ы П е р е ч и сл е н и я Р а здел ы П е р е ч и сл е н и я 9 9 .1 .1 .1 — 2 2 — 9 . 1 .1 .2 — 2 3 — 9 . 1 . 2 — 2 4 — 9 . 1 . 3 — — — 9 .1 .3 .1 — 2 5 — 9 . 1 .3 .2 — 2 6 — 9 .1 .4 — — — 9 .1 .4 .1 — 2 7 — 9 . 1 .4 .2 — 2 8 — 9 . 1 . 5 — 2 9 — 9 . 1 . 6 — 3 0 — 9 . 1 . 7 — 31 — 9 . 1 . 8 — — — 9 .1 .8 .1 — 3 2 — 9 . 1 .8 .2 — 3 3 — 9 . 1 . 9 — 3 4 — 9 . 2 — — — 9 .2 .1 — — — 9 . 2 .1 .1 — 3 5 — 9 . 2 . 1 . 2 — 3 6 — 9 . 2 . 2 — 3 7 — 9 . 3 — — — 9 .3 .1 — — — 9 .3 .1 .1 — 3 8 — 9 . 3 .1 .2 - 3 9 — 9 . 3 .1 .3 — 4 0 — 9 . 3 . 2 — 4 1 — 10 10.1 — — — 1 0 .1 .1 — 4 2 — 1 0 .1 .2 — 4 3 — 1 0 .1 .3 — 4 4 — 1 0 .1 .4 — 4 5 — 1 0 .1 .5 — — — 1 0 .1 .5 .1 — 4 6 — 17
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Окончание таблицы ДА. 1Структура настоящею стандартаСтруктура международного документаРазделыПодразделыПеречисленияРазделыПеречисления1010.1.5.24710.1.5.34810.1.5.44910.1.610.1.6.15010.1.6.25110.252Приложение АПриложение 2Приложение БПриложение 3Приложение ВПриложение 4Приложение ГПриложение 5БиблиографияЛитература18
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Б и б л и о г р а ф и я(1]ВВА (1995). Long-term toxicity test with Chironomus riparius: Development and validation of a new test system.Edited by M. Streloke and H. Kopp. Berlin. 1995(2]Fleming R. et al. (1994). Sediment toxicity test for poorly water-soluble substances. Final Report to them EuropeanCommission. Report No: EC 3738. August 1994. W R c. UK(3]SETAC (1 993). Guidance Document on sediment toxicity tests and bioassys for freshwater and marine environ­ments. From the W OSTA Workshop held in the Netherlands(4]A STM lntemationali'E1706 (2002). Test method for measuring the toxicity of sediment-associated contaminants withfreshwater invertebrates, pp. 1125-1241. In A S TM International 2 0 02 Annual Book of Standards. Volume 11.05.Biological effects and environmental fate; Biotechnology: Pesticides. ASTM International, West Conshohocken. PA(5]Environmental Canada (1997). Test for growth and survival in sediment using larvae of freshwater midges(Chironomus tentans or Chironomus riparius). Biological test method, report SPE 1/R M /32. December 1997(6 ]US-EPA (2000). Methods for measuring the toxicity and bioaccumulation of sediment-associated contaminants withfreshwater invertebrates. Second edition. EPA 600j'R-99.'064. March 2000. Revision to the first edition dated June1994(7]US-EPA>'OPPTS 850.1735. (1996): whole sediment acute toxicity invertebrates(8]US-EPAi'OPPTS 850.1790. (1996): chironomid sediment toxiaty test(9]Milani D.. Day K . E . . McLeay D.J. and Kirby R.S. (1 996). Recent intra- and inter-laboratory studies related to the d e ­ velopment and standardization of environment Canada's biological methods for measuring sediment toxicity usingfreshwater amphipods (Hyaleila azteca) and midge larvae (Chironomus riparius). Technical Report. EnvironmentCanada. National W ater Research Institute. Burlington. Ontario. Canada(10]Sugaya Y. (1997). Intra-specific variations of the susceptibility of insecticides in Chironomus yoshimatsui. Jp. J.Sanit. Zool.. 48 (4):345 -3 5 0(11]Kawai K. (1986). Fundamental studies on Chironomid allergy. I. Culture methods of some Japanese Chironomids(Chironomidae. Diptera). Jp. J. Sanit. Zool.. 3 7 (1):47-57(12]O E C D (2000). Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of difficult substances and mixtures. OECDEnvironment. Health and Safety Publications. Series on Testing and Assessment No. 23(13]Environment Canada (1995). Guidance Document on Measurement of Toxicity Test Precision using control sedi­ ments spiked with a reference toxicant. Report E P S 1/R M /30. September 1995(14]O E C D Test Guideline 207. (1 984). Earthworm. Acute Toxicity Test(15]Suedel B.C. and Rodgers J.H. (1 994). Development of formulated reference sediments for freshwater and estua­ rine sediment testing. Environ. Toxicol. Che.. 13:1163-1175(16]Naylor C. and Rodrigues C. (1995). Development of a test method for Chironomus riparius using a formulatedsediment. Chemosphere. 31: 3 2 9 1 -3 3 0 3(17]Dunnett C.W. (1964). A multiple comparisons procedure for comparing several treatments with a control. J. Amer.Statis. Assoc.. 50:1096-1121(18]Dunnett C.W. (1964). New tables for multiple comparisons with a control. Biometrics. 20: 48 2 -4 9 1(19]Williams D.A. (1971). A test for differences between treatment means when several dose levels are compared witha zero dose control. Biometrics. 27: 103-117(20]Williams D.A. (1 972). The comparison of several dose levels with a zero dose control. Biometrics. 28: 51 0-53 1(21]R ao J.N.K. and Scott A.J. (1992). A simple method for the analysis of clustered binary data. Biometrics. 4 8 :5 7 7 -5 8 5(22]Christensen E.R. 1984. Dose-response functions in aquatic toxicity testing and the Weibull model. W ater Research1 8 .2 1 3 -2 2 1(23]Bruce and Versteeg 1992. A statistical procedure for modeling continuous toxicity data. Environmental Toxicologyand Chemistry. 11:1485-1494(24]Slob W .. 2002. Dose-response modeling of continuous endpoints. Toxicol. Sci.. 6 6 . 2 9 8 -3 1 219
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5У Д К 6 1 :3 8 2 .3 :0 0 6 .3 5 4М К С 1 3 .0 2 0 .0 1Т 5 8Кл ю чев ы е сл ов а: м ед и ц и н с ки е и зд ел и я д ля д и а гн о сти ки in vitro, и н ф о р м а ц и я , п р е д о с та в л я е м а яи зготов и тел ем , м ар ки р о в ка, тер м и н ы , и нстр укц и я по п р и м е н е н и ю 20
Редактор Е.А. КириленкоТехнический редактор В.Н. ПрусаковаКорректор Г.В. ЯковлеваКомпьютерная верстка Ю.В. Поповой С д а н о в н а б о р 0 9 .1 1 .2 0 1 5 . П о д п и с а н о в п е ч а т ь 2 5 .0 2 2 0 1 6 Ф ор ы а т 6 0 » 8 4 1 Г а р н и ту р а А р и а л . У ел. п е ч . л 3 .2 6 . У ч.-и а д . л . 2 .9 0 . Т и р а ж 32 э м . Зак. 663. H a6pai«o в ИД -Ю р и с п р у д е н ц и я » . 115419. М о с кв а , ул. О р д ж о н и ки д зе . 11 w w w . ju ris ir d a t. ru y -b o o X © m a iU u И зд а н о и о т п е ч а та н о во Ф Г У П - С Т А Н Д А Р Т И Н Ф О Р М -. 1 2 3 9 9 5 М о сква . Г р а н а тн ы й п е р ., 4w w w .g o s lin fo .ru in fo © g o s 1in fo .ruГОСТ 33635-2015

М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й С О В Е Т П О С Т А Н Д А Р Т И З А Ц И И , М Е Т Р О Л О Г И И И С Е Р Т И Ф И К А Ц И И(М Г С )IN T E R S T A T E C O U N C IL F O R S T A N D A R D IZ A T IO N . M E T R O L O G Y A N D C E R T IF IC A T IO N(IS C )ГОСТ М Е Ж Г О С У Д А Р С Т В Е Н Н Ы Й 33635 С Т А Н Д А Р Т — 2015МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ,ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЙ ОПАСНОСТЬДЛЯ ОКРУЖАЮ Щ ЕЙ СРЕДЫИспытание токсичности на хирономидахс использованием обогащенного осадка OECD, Test No. 218:2004 (MOD)И з д а н и е о ф и ц и а л ь н о еМосква Стаидлртинформ 2016образец сертификата
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5 ПредисловиеЦ е л и , осно в ны е принципы и ос но в но й п о р я д о к п р о в е д ен и я р а б о т по м е ж го су д а р ств ен н о й с т а н ­д а р т и з а ц и и ус танов л ен ы Г О С Т 1 .0 — 9 2 « М е ж го с у д а р с тв е н н а я си с те м а с т а н д а р т и за ц и и . О сн о в н ы е по­л о ж е н и я » и Г О С Т 1.2— 2 0 0 9 « М е ж го с у д а р с тв е н н а я с и с те м а ста н д а р т и за ц и и . С т а н д а р ты м е ж го с у д а р ­ств ен н ы е . п р ав и л а и р е ко м е н д а ц и и по м е ж го су д а р ств ен н о й ста н д а р т и за ц и и . П р а в и л а р а зр а б о тки ,п р и н я ти я , п р и м е н е н и я , о б н о в л ен и я и отм ены »С в е д е н и я о с т а н д а р т е1 П О Д Г О Т О В Л Е Н Ф ед ер а л ь н ы м госуд арств енн ы м у н и та р н ы м п р е д п р и я ти е м «В се р о сси й ски й н а ­уч н о -и сс л ед о в а те л ь ски й и н с ти тут с т а н д а р т и за ц и и м а т е р и а л о в и т ехн о л о ги й » (Ф Г У П « В Н И И С М Т » ) наосно в е с о б ств ен н о го п е р е в о д а н а русский язы к д о к у м е н т а , ука за н н о го в п ун кте 42 В Н Е С Е Н Ф е д е р а л ь н ы м а ге н тств о м по те х н и ч е с ко м у регул и р о в а н и ю и м етрол огии3 П Р И Н Я Т М е ж го с у д а р с тв е н н ы м со в ето м по с т а н д а р т и за ц и и , м етр о л о ги и и с е р т и ф и ка ц и и (п р о ­токо л от 10 д е к а б р я 2 0 1 5 г. № 4 8 -2 0 1 5 )З а п р и н я ти е прого ло со в али : К р а т ко е н а и м е н о в а н и е стр аны Код с тр а н ы п о М К С о в р а щ е н н о е н а и м е н о в а н и е н а ц и о н а л ь н о го о р га н а п о М К (И С О 316 6 ) 0 0 4 - 9 7 < И С 0 3 16 6) 0 0 4 - 97 п о ста н д а р ти за ц и иАрменияAMМинэкономики Республики АрменияКазахстанKZГосстандарт Республики КазахстанКиргизияKGКыргызстандартМолдоваMDМолдова-СтандартРоссияRUРоссгандарт4 П р и казо м Ф ед е р а л ь н о го а ге н т с т в а по т е х н и ч е с ко м у р егул и р о в а н и ю и м етр ол оги и от 11 д е к а б р я2 0 1 5 г. N° 2 1 5 5 -с т м еж го су д а р ств ен н ы й с т а н д а р т Г О С Т 3 3 6 3 5 - 2 0 1 5 в в ед ен в д е й с т в и е в ка ч е с т в е н а ­ц и о н ал ь н о го с т а н д а р т а Р о сси й ской Ф е д е р а ц и и с 1 с е н тя б р я 2 0 1 6 г.5 Н а с т о я щ и й с т а н д а р т я в л я е тся м о д и ф и ц и р о в а н н ы м по о т н о ш е н и ю к м е ж д у н а р о д н о м у д о к у м е н ­т у O E C D T e s t N o . 2 1 8 .2 0 0 4 S e d im e n t-W a te r C h iro n o m id To xicity T e s t U sin g S p ik ed S e d im e n t. (И с п ы т а н и ет о к с и ч н о с т и н а х и р о н о м и д а х с и с п о л ь з о в а н и е м о б о г а щ е н н о г о о с а д к а ) п утем и з м е н е н и я структуры .С р а в н е н и е структуры м е ж д у н а р о д н о го д о к у м е н т а с о стр у кту р о й н а с т о я -щ е го с т а н д а р т а п р и в е д е н о вд о п о л н и тел ь н о м п р и л о ж е н и и Д А .Н а и м е н о в а н и е н а с т о я щ е го с т а н д а р т а и з м е н е н о о тн о си тел ь н о н а и м е н о в а н и я м еж д у н а р о д н о го д о ­ку м е н т а д л я п р и в е д е н и я в со о тв етств и е с Г О С Т 1 .5 (п у н кт 3 .5 ).П е р е в о д с ан гл ий ского я зы ка (o n ).С т е п е н ь со отв етств ия — м о д и ф и ц и р о в а н н а я (M O D )6 В В Е Д Е Н В П Е Р В Ы ЕII
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информаци­онном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — е ежемесячноминформационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или от­мены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячноминформационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведом­ление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования на офи-циалыюм сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сетиИнтернет.© С там д арти нф о рм . 2 0 1 6В Р оссийской Ф е д е р а ц и и н а с т о я щ и й с та н д а р т н е м о ж ет бы ть полностью ил и ч а с т и ч н о в о с пр о и з­в ед ен . ти р аж и р о в ан и р а с п р о с тр а н е н в ка ч е с тв е о ф и ц и ал ь н о го и зд ан и я б е з р а з р е ш е н и я Ф ед ер а л ь н о гоа ге н т с т в а по т е х н и ч е с ко м у регул и р о в а н и ю и м етр ол оги иIII
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5 Содержание1 О б л а с ть п р и м е н е н и я ....................................................................................12 Т е рм и н ы и о п р е д е л е н и я .......................................................................13 П р и н ц и п м е т о д а ................................................................14 И н ф о р м а ц и я о б и сп ы ту ем о м в е щ е с т в е ..............................................15 С т а н д а р тн ы е в е щ е с т в а .......................26 Д о с то в е р н о с ть и с п ы т а н и я .............................................................................................................................................................27 О п и с а н и е м е т о д а ...............................................................................................................................................................................27.1 И с п ы туе м ы е с о с у д ы ............................................................................................................................................................... 27 .2 В ы бор ви да х и р о н о м и д .......................................................................................................................................................... 27 .3 О с а д о к ............................................................................................................................................................................................27 .4 В о д а .................................................................................................................................................................................................37 .5 С то ко в ы е растворы — о б о га щ е н н ы й о с а д о к .............................................................................................................. 38 Д и з а й н и с п ы та н и я ............................................................................................................................................................................... 38.1 Д и з а й н д л я р е гр е сси о н н о го а н а л и з а ..............................................................................................................................48 .2 Д и з а й н д л я ус та н о в л ен и я N O E C /L O E C ...............................................................................................48 .3 О п р е д е л е н и е д и а п а з о н а пред ел ь ны х к о н ц е н т р а ц и й ............................................................................................ 49 П р о в е д е н и е и с п ы т а н и я ........................................................................................................................................49.1 У сл ов и я и с п ы т а н и я ...............................................................................49 .2 Н а б л ю д е н и я ................................................................................................................................................................................. 69 .3 А н а л и т и ч е с ки е о п р е д е л е н и я ............................610 Д а н н ы е и о тч ет о п р о в е д ен и и и с п ы та н и я ......................................................................................................................... 710.1 О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в ........................................................................................................................................................71 0 .2 О т ч е т о п р о в е д ен и и и с п ы т а н и я ...................................................................................................................................... 8П р и л о ж е н и е А (р е к о м е н д у е м о е ) Р е ко м е н д а ц и и по культивированию Chironomus riparius....................... 10П р и л о ж е н и е Б (р е к о м е н д у е м о е ) П р и го то в л ен и е и скусств ен но го о с а д к а ........................................................... 13П р и л о ж е н и е В (р е к о м е н д у е м о е ) Х и м и ч е с к и е х а р а кте р и с ти ки п р и е м л е м о й воды.п р е д н а зн а ч е н н о й д л я р а з в е д е н и я ............................................................................................................... 14П р и л о ж е н и е Г (р е к о м е н д у е м о е ) Р уков о дств о д л я м о ни то р и н гав ы л уп л я ем о сти л и чи н о к х и р о н о м и д ..........................................................................................................15П р и л о ж е н и е Д А (с п р а в о ч н о е ) С р а в н е н и е структуры м еж д у н а р о д н о го д о ку м е н тас о стр у кту р о й н а с т о я щ е го с т а н д а р т а .....................................................................................................16Б и б л и о гр а ф и я ....................................................................................................................................................................................... 19IV
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5 ВведениеВ о сно в ном н а с т о я щ и й с т а н д а р т о с н о в ан н а с у щ е с тв у ю щ и х п р отоко л ах по о ц е н к е токси чно стид л я C h iro m o n u s riparius и C h iro m o n u s te n ta n s . кото ры е б ы л и ра зр аб о та н ы в Е в р о п е и С е в е р н о й А м е р и ке[2 ]-[8 ], и кол ьцевом м е то д е [1]. [6 ], [9].В д а н н о м с т а н д а р т е и спол ьзован протоко л в озд ей ств ия ч е р е з о б о га щ е н и е о с а д к а . В ы бор с о о т ­в етств ую щ его п р о то ко л а в озд ей ств ия зав и си т от п р е д п о л а га е м о го п р и м е н е н и я и сп ы тани я . П р отоко лс о б о га щ е н и е м о с а д к а п р е д н а зн а ч е н д л я и м и та ц и и а кку м ул и р о в а н н ы х ур о в н ей хи м и ч ески х в е щ е с тв ,п е р с и с те н тн ы х в о с а д ке . Д а н н а я с и с те м а в о зд е й ств и я в кл ю ч а е т о б о га щ е н и е о с а д ка и сп ы туем о й с и с т е ­мы «о с а д о к — в о д а » .В е щ е с т в а , т р е б у ю щ и е о ц е н ки и х вл ия н и я н а ор ган и зм ы , за с е л я ю щ и е о с ад о к, ка к п р ав и л о , н а х од я тс я в д а н н о й с р е д е в т е ч е н и е д л и те л ь н о го п е р и о д а в р е м ен и . О р ган и зм ы , за с е л я ю щ и е осад ок, м огутподв ергать ся в оздей ств ию х и м и ч е с ки х в ещ ес тв целы м ряд ом п утей . О т н о с и т е л ь н о е з н а ч е н и е каж догоп ути воздей ств ия и в р е м я , т р е б у ю щ е е с я д л я каж д о го и з них в п роя в л ен ии о б щ и х то кси ч ески х э ф ф е к ­тов. зав и си т о т ф и зи ко -хи м и ч ески х свойств и сп ы туем о го х и м и ч еско го в е щ е с тв а . Д л я в ещ ес тв с высокойа д с о р б ц и е й (н а п р и м е р , с log K ow > 5 ) и л и д л я с о е д и н е н и й , ко в а л е н тн о св я зы в аю щ и хся с о т л о ж е н и я м и ,п о гл о щ е н и е о р га н и зм а м и з агр я зн е н н о го ко р м а м о ж е т бы ть осно в ны м п утем в оздей ств ия. Д л я п р ед ­у п р е ж д е н и я н ед о о ц ен ки токси ч но сти вы соколипоф ильны х с о е д и н е н и й кор м д о б а в л я ется д о в н е сен и яи сп ы туем о го в е щ е с тв а . Д ан н ы й с та н д а р т о с н о в ан н а д л и те л ь н о м в оздей ств ии д л я о ц е н ки всех воз­м о ж н ы х п у те й вл ия н и я и сп ы ту ем о го в е щ е с тв а н а л и чи но к. П р о д о л ж и те л ь н о с ть и сп ы та ни я н ахо ди тсяв п р е д е л а х 2 0 - 2 8 сут д ля C h iro m o n u s riparius и C h iro m o n u s yo shim atsui и 2 8 - 6 5 с у т д л я C h iro m o n u ste n ta n s . Е сл и д л я о п р е д е л е н н о й ц е л и т р еб ую тся р е зу л ь таты кр аткоср оч ны х и с с л е д о в а н и й , н а п р и м е рд л я о ц е н ки э ф ф е к то в н естаб и л ь н о го х и м и ч еско го в е щ е с тв а , то из п р о б и зв л ека ю т д о п о л н и тел ь н ы е по­в торн ости и а н а л и зи р у ю т 1 0 сут.И з м е р я е м ы м и кон ечны м и точ кам и являю тся о б щ е е ко л и че ств о вы л упивш ихся взрослы х о с о б е й ив р е м я д о и х в ы л упл ен и я. Е сл и треб ую тся результаты кр аткоср оч ны х и сс л ед о в а н и й , то р е ко м е н д у е тс яп роводить о ц енку в ы ж и в аем ости и р о ста л и чи н о к н е р а н е е ч е м н а 1 0 - е сутки, используя при этом д о ­п о л ни тел ьн ы е п овторности по м е р е н еоб ход и м ости .Р е ко м е н д у е тс я и сп ол ьзовать искусств ен ны й осад ок. И скусств енн ы й о с а д о к и м ее т н еско ль ко п р е ­и м у щ е с тв по ср ав н е н и ю с природны м и о тл о ж е н и я м и :- в ар и аб ел ь н о сть в э к с п е р и м е н т а х с н и ж а е тс я з а с ч е т того, ч то он п р ед став л я е т воспроизводимы й« с та н д ар ти зо в ан н ы й м атр и кс» и о т п а д а е т н ео б хо д и м о с ть в п ои ске н е за гр я з н е н н о го и чи с то го о с ад ка;- и сп ы та ни я м о ж н о н ачи н ать в л ю б о е в рем я го д а, н е стал ки в ая сь с се зо н н о й в ар и абел ь но сть юи сп ы туем о го о с а д к а , и отсутств ует н ео б хо д и м о с ть в п ред в ар и тел ь н о й о б р а б о т к е о с а д ка д л я у д ал ен и яп ри ро дн ой ф аун ы ; п р и м е н е н и е и скусств ен но го о с а д к а т а к ж е с н и ж а е т затраты н а отб о р в ес те ств е н н ы хус л о в и я х д о стато ч н о го ко л и ч е ств а о с а д ка д ля о б ы чн ого испы тания;- п р и м е н е н и е и скусств ен но го о с а д ка п озво ля ет ср ав н и ть токси ч но сть и кл а сс и ф и ц и р о в ать в е щ е ­ств а со о тв етств ую щ и м о б р азо м .И с п о л ь зов ан ны е о п р е д е л е н и я п ри в ед ены в р а зд е л е 2.V
ГОСТ 33635— 2015МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙСТАНДАРТМ Е Т О Д Ы И С П Ы Т А Н И Й Х И М И Ч Е С К О Й П Р О Д У К Ц И И ,П Р Е Д С Т А В Л Я Ю Щ Е Й О П А С Н О С Т Ь Д Л Я О К Р У Ж А Ю Щ Е Й С Р Е Д ЫИ с п ы т а н и е т о к с и ч н о с т и н а х и р о н о м и д а х с и с п о л ь з о в а н и е м о б о г а щ е н н о г о о с а д к аTesting of chemicals of environmental hazard.Sedim ent-W ater Chironomid Toxicity Test Using Spiked SedimentД ата введения — 2016— 09— 01 1 Область примененияН а с т о я щ и й с т а н д а р т ус та н а в л и в а е т м ето д о ц е н ки вл ия н и я п род ол ж и тель н ого в озд ей ств ия и с ­п ы туем ого х и м и ч еско го в е щ е с тв а ч е р е з о б о га щ е н и е о с а д ка на л и чи нки п реснов о дн ы х двукры лы хChironomus sp., засе л я ю щ и е естественн ы е отл о ж е ни я . М о ж но использовать д руги е хо ро ш о известны евиды х и р о н о м и д . н а п р и м е р Chironomus yoshimatsui [10]. [11]. 2 Термины и определенияВ н а с т о я щ е м с т а н д а р т е п р и м ен ен ы с л е д у ю щ и е тер м и н ы с со о тв етств ую щ и м и о п р е д е л е н и я м и :2.1 и с к у с с т в е н н ы й и л и р е к о н с т р у и р о в а н н ы й , с о с т а в л е н н ы й и л и с и н т е т и ч е с к и й о с а д о к(fo rm u la te d s e d im e n t o r reco nstituted, artificial o r sy nth etic s e d im e n t): С м е с ь в ещ ес тв , и сп ол ьзованны х д л яи м и та ц и и ф и зи ч ески х ко м п о н ен то в при ро дн ого о с а д ка .2 .2 н а д о с а д о ч н а я в о д а (o verlyin g w a te r): В од а, н а х о д я щ а я с я н а д о с а д ко м в и сп ы ту ем о м со суд е.2 .3 и н т е р с т и ц и а л ь н а я в о д а и л и п о р о в а я в о д а (interstitial w a te r): В о д а, з а н и м а ю щ а я п р о с тр ан ­ств о м е ж д у о с а д ко м и ч а с т и ц а м и почвы.2 .4 о б о г а щ е н н ы й о с а д о к (s p ike d se d im en t): О с а д о к, в которы й д о б а в л е н о и сп ы ту е м о е в ещ ес тв о . 3 Принцип методаЛ и ч и нки хи р о н о м и д перв о й с та д и и ра зв и ти я подв ергаю тся в оздей ств ию и сп ы туем о го х и м и ч еско гов е щ е с тв а в р я д е ко н ц е н тр а ц и й в с и с те м а х о с а д о к — вода. И с п ы ту е м ы е в е щ е с тв а вно сят в о с а д о к, аз а т е м л и чи нки хи р о н о м и д перв о й с та д и и ра зв и ти я д о б а в л я ю т в и сп ы ту ем ы е ста ка н ы со стаб и л и зи р ован ны м и ко н ц е н тр а ц и я м и в о с а д к е и воде. В ко н ц е исп ы тани я о п р е д е л я ю т в ы л уп л ен и е и ско ро сть р а з ­в и тия хи р о н о м и д . Т а к ж е при н ео б хо д и м о с ти ч е р е з 10 сут оп р е д ел я ю т в ы ж и в ае м о сть и м а с с у л и чи но к(и спол ьзуя д о п о л н и тел ь н ы е п ов торн ости ). П о л у ч е н н ы е д а н н ы е ан ал и зи р ую т, используя р егресси он н уюм о дел ь , д л я ус та н о в л ен и я ко н ц е н тр а ц и и , ко то р ая буд ет вызывать х % с н и ж е н и е в ы л упл ен и я, вы ж и в а­е м о с т и или р о с т а л и чи н о к (н а п р и м е р . E C 1S, Е С 50 и т. п .), и л и . используя п р о в е р ку с та ти с ти ч е с ко й гипо­тезы . д л я о п р е д е л е н и я N O E C /L O E C (н е э ф ф е кти в н о й н а б л ю д а е м о й к о н ц е н тр а ц и и /н а и м е н ь ш е й н а б л ю ­д а е м о й э ф ф е кти в н о й ко н ц е н тр а ц и и ). Д л я п о сл ед н его а н а л и з а т р еб уется с р а в н е н и е з н а ч е н и й э ф ф е к тас кон трол ь ны м и з н а ч е н и я м и с и сп о л ь зо в ани ем с т а ти с ти ч е с ки х м ето дов . 4 Информация об испы туем ом веществеН е о б хо д и м о и м еть св е д ен и я о ра ств о р и м о сти и сп ы туем о го в е щ е с тв а в воде, д а в л е н и и п ар а , и з ­м е р е н н о м ил и р а сс ч и та н н о м р а с п р е д е л е н и и в о с а д к е и с таб и л ь н о сти в вод е и о с а д к е . Д о л ж е н бытьИ зд ани е оф ициальное 1
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5в н ал и ч и и н а д е ж н ы й а н а л и ти ч е с ки й м ето д д л я ко л и че ств ен н о го о п р е д е л е н и я и сп ы ту ем о го в ещ ес тв ав н ад о с а д о ч н о й ж и д ко с ти , поро в ой вод е и о с а д к е с известно й и у с та н о в л ен н о й точностью и н и ж ни мп р е д е л о м о б н а р у ж е н и я . П о л о зн а я и н ф о р м а ц и я в кл ю ч ае т с тр у кту р н ую ф о р м у л у и чи с то ту и спы туем огов е щ е с тв а . Т а к ж е пол езн ы м и являю тся св е д ен и я о х и м и ч еско м п о в ед ен и и и сп ы туем о го в е щ е с тв а (н а ­п р и м ер . р а с с е я н и и , р а зр у ш е н и и в аб и о т и ч е с ки х и би о ти ч ески х ус л о в и я х и т. п .). Д о п о л н и т е л ь н о е р у ко ­водство по и сп ы тани ю в е щ е с тв с ф и зи ко -х и м и ч е с ки м и св о й ствам и , которы е затруд няю т п р о в е д ен и еи сп ы тани я , п р и в е д е н о в [1 2 ]. 5 Стандартные веществаС т а н д а р тн ы е в е щ е с тв а п ер и о д и ч е ски п од в ергаю т и сп ы тани ю д л я п о д тв ер ж д е н и я того, ч то п р о ­токо л и сп ы та ни я и ус л о в и я исп ы тани я являю тся н а д е ж н ы м и . П р и м е р а м и с т ан д а р тн ы х т о кси ка н то в ,у с п е ш н о и спол ьзуем ы х в кольцевы х м ето д ах и при в а л и д а ц и и , являю тся: л и н д а н , тр и ф л у р ал и и . пен-т а х л о р ф е н о л , хл о р и д ка д м и я и х л о р и д ка л и я [1]. [2]. [5]. [6 ]. [13]. 6 Д остоверность испытанияД л я исп ы тани я использую т с л е д у ю щ и е кри тер и и д о стов ерно сти :- в ы л упл ен и е в ко н тр о л я х д о л ж н о со став л я ть в ко н ц е исп ы тани я н е м е н е е 7 0 % [1]. [6 ];- п ери о д в ы л упл ения л и чи н о к С. riparius и С. yoshimatsui во взрослы е о с о б и в кон трол ьны х с о ­судах д о л ж е н нахо ди ть ся в п р е д е л а х от 12 д о 2 3 сут п о сл е их в н е с е н и я в сосуд ы , а д л я С. tentans т р е ­буется 2 0 - 6 5 сут;- в ко н ц е исп ы тани я оп р е д ел я ю т p H и к о н ц е н тр а ц и ю р а с тв о р е н н о го ки сл ор од а в ка ж д о м со суд е.К о н ц е н т р а ц и я ки сл о р о д а д о л ж н а с о став л я ть н е м е н е е 6 0 % от зн ач ен и я н а с ы щ е н и я воздухом (A S V )при и сп ол ь зо в анн ой т е м п е р а ту р е , а pH н ад о с а д о ч н о й воды н ахо д и тся в д и а п а з о н е 6 - 9 во всех и сп ы ­т уем ы х сосуд ах;- т е м п е р а т у р а воды н е д о л ж н а р а зл и ча ть ся б о л е е ч е м н а ± 1 .0 °С . Т е м п е р а т у р у воды с л ед ует к о н ­тр о л и р о в ать в и зо тер м и ч еско м п о м е щ е н и и ч е р е з о п р е д е л е н н ы е п р о м е ж у тки врем он и . 7 Описание метода7.1 И с п ы т у е м ы е с о с у д ыИ с п ы т а н и е п ров о дят в стекл я н н ы х с т а к а н а х в м ести м о сть ю 6 0 0 мл с д и а м е т р о м 8 см . П р и о б е ­сп еч ен и и со о тв етств ую щ ей вы соты с л о я н ад о сад о ч н о й воды и о с а д к а пригодны и д р у ги е сосуды .П о в ер х н о сть о с а д к а д о л ж н а бы ть д о с та то ч н о й д л я о б е с п е ч е н и я 2 - 3 см 2 н а личинку. С о о т н о ш е н и е вы­соты сл о я о с а д ка к вы соте н ад о с а д о ч н о й воды д о л ж н о со став л я ть 1 :4. И с п ы туе м ы е сосуды и д р уго ео б о р уд о в ан и е , ко то р о е к о н т а кт и р у е т с и сп ы туем о й си с те м о й , д ол ж ны бы ть изготовлены пол ность ю изс т е кл а ил и д руго го хи м и ч ески и не р тн о го м а т е р и а л а (н а п р и м е р , т е ф л о н а ).7 .2 В ы б о р в и д а х и р о н о м и дП р ед по чти тел ь н ы м видом д л я и сп ол ьзования в и спы тании яв л я ется Chironomus riparis, м о ж н ои спол ьзовать Chironomus tentans. но с н им т р у д н е е р а б о та ть и тр еб уется б о л е е д л ител ьн ы й п ер и о ди сп ы тани я . Т а к ж е м о ж ет и спол ь зо в аться Chironomus yoshimatsui. П о д р о б н о е о п и с а н и е м ето д ов кул ь­т и в и р о в ан и я Chironomus riparis п р ивод ится в п р и л о ж ен и и А . И м е е т с я и н ф о р м а ц и я о б ус л о в иях культи­в и р о в ани я д ля д р уги х видов, т. е . Chironomus tentans [4] и Chironomus yoshimatsui [11]. П е р е д н ач а л о мисп ы тани я п ров о дят и д е н т и ф и ка ц и ю в и д а , но э то н е т р еб уется д л я каж д о го и сп ы тани я , ес л и организм ыпрои сход ят и з в н у тр и л а б о р ато р н о й культуры.7 .3 О с а д о к7 .3 .1П р ед п о ч ти те л ь н о и сп ол ьзовать и скусственны й о с а д о к (т а к ж е н азы в а ем ы й р е ко н с тр у и р о в а н ­ны м . со став л е н н ы м ил и с и н те ти ч е с ки м ). Е сл и использую т п риродны й о с а д о к, то е го с л ед ует о х а р а к­те р и зо в а ть (о п р ед е л и ть p H . с о д е р ж а н и е о р ган и ч ес ко го угл е р о д а , а т а к ж е р е ко м е н д ую тся т а ки е п а р а ­м етр ы . ка к с о о т н о ш е н и е C /N и гр а н у л о м е т р и я ), и он н е д о л ж е н с о д е р ж а ть ка ки х -л и б о за гр я з н е н и й ид р у ги х о р ган и зм о в , ко н кур и рую щ и х с хи р о н о м и д а м и или п и таю щ и хс я и м и . Т а к ж е п е р е д и сп о л ь зо в а­н и е м в и с п ы та н и и т о к с и ч н о с т и д л я х и р о н о м и д п р и р о д н ы й о с а д о к ко н д и ц и о н и р у ю т в т е ч е н и е 7 сут 2
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5в т е х ж е усло в ия х, в которы х будут п роводить п о с л е д у ю щ е е и сп ы та ни е. В д а н н о м и сп ы тани и [1], [15].[1 6] р е ко м е н д у е т с я п р и м ен я ть сл ед ую щ и й искусств ен ны й о с а д о к н а о с н о в е и скусств ен но й почвы, и с ­п о л ьзов а нн ой в с т а н д а р т е 2 0 7 [14]:а ) 4 - 5 % (с у х а я м а с с а ) т о р ф а : p H ка к м о ж н о б л и ж е к 5 ,5 - 6 ,0 ; в аж н о и спол ьзовать то р ф в в и д е и з ­м ел ьченного п о р о ш ка (р а з м е р ча сти ц S 1 м м ), в ы суш ен но го тол ь ко на воздухе;б) 2 0 % (с у х а я м а с с а ) као л и н о в о й глины (с о д е р ж а н и е ка о л и н и та п ред по чти те л ь н о в ы ш е 3 0 % );в) 7 5 - 7 6 % (с у х а я м а с с а ) кв ар ц ев о го п е с ка (д о л ж е н п р е о б л а д а ть м ел ки й п е с о к с б о л е е ч е м 5 0 %ч а с т и ц р а зм е р о м в п р е д е л а х от 5 0 д о 2 0 0 мкм);г) д е и о н и зи р о в а н н а я вода д о б а в л я е тс я д л я о б е с п е ч е н и я в л аж н о сти кон еч но й с м е с и в п р ед ел ах3 0 - 5 0 % ;д ) хи м и ч ески чисты й к а р б о н а т кал ь ц и я (С а С О э ) д о б а в л я ется д л я д о в е д е н и я p H кон еч но й см есио с а д ка д о (7 .0 ± 0 ,5 ). С о д е р ж а н и е органического угл ер од а конечной см еси д о л ж н о с оставлять (2 ± 0 .5 ) %и д о в о д и ть с я с о о тв етств ую щ и м и ко л и ч е ств ам и то р ф а и п е с к а по п ер е ч и с л е н и я м а ) и в).7 .3 .2Н е о б х о д и м о и м еть и н ф о р м ац и ю о б и сто ч ни ке т о р ф а , као ли н ов о й глины и п е с ка . К о м по нентыо с а д к а и ссл ед ую т н а о тсу тс тв и е хи м и ч еско го за гр я з н е н и я (н а п р и м е р , тя ж ел ы м и м е т а л л а м и , х л о р о р га-и и ч е ски м и с о е д и н е н и я м и , ф о с ф о р о р га н и ч е с ки м и с о е д и н е н и я м и и т. п .). П р и м е р п ол учени я и ску сств ен ­ного о с а д к а о п и сан в п р и л о ж е н и и Б. Т а к ж е со с та в л я ю щ и е ко м по нен ты с м е ш и в а ю т в сухом в и д е, ес л ибы л о п о ка за н о , ч то п о с л е д о б а в л е н и я н ад о с а д о ч н о й воды н е п рои сход и т р а зд е л е н и я ко м п о н ен то в ( н а ­п р и м е р , всплы тия ч а с т и ц т о р ф а ) и ч то т о р ф ил и о с а д о к б ы л и д о с та то ч н о конд иц и о ни р ов ан ы .7 .4 В о д аВ ка ч е с т в е испы туем о й воды использую т лю бую воду, со отв етств ую щ ую по своим х и м и ч ески м х а ­р а кте р и с т и ка м п р и е м л е м о й вод е д л я р а зв е д е н и я , ка к у к а з а н о в п р и л о ж ен и я х А и В . Л ю б а я п о д х о д я щ а явод а — п р и р о д н ая вод а (п о в ер хн о стн ая ил и гр унтов ая в о д а), в о с стан о в л е н н ая вода (см. п р и л о ж е н и е А )ил и д е х л о р и р о в а н н а я водоп ро в одн ая вода — яв л я ется п р и е м л е м о й в ка ч е с т в е воды д л я кул ьтивиро­в ан и я и воды д л я и сп ы тани я , ес л и хи р он ом и д ы будут в ы ж и в ать в н е й во в рем я кул ьтивирования и п р о ­в ед ен и я и сп ы та ни я б е з п р и зн ако в с т р е с с а . В н а ч а л е исп ы тани я з н а ч е н и е p H и сп ы туем о й воды д ол ж нос о став л я ть о т 6 д о 9 . и о б щ а я ж ес тко сть д о л ж н а бы ть н е в ы ш е 4 0 0 м г/л по С а С 0 3. О д н а к о е с л и и м еетсяп р е д п о л о ж е н и е о в заи м о д ей ств и и ионов ж е с тко с т и с и спы туем ы м в ещ ес тв о м , то н ео б хо д и м о и сп ол ь ­зовать воду с б о л е е н изко й ж ес тко сть ю (и таки м о б р а з о м , в д а н н о й си туац и и н е с л е д у е т использоватьс р е д у E le n d t M e d iu m М 4 ). Во в р е м я всего исп ы тани я использую т о д и наков ы й ти п воды. Х ар а кте р и с т и кика ч е с тв а воды, п р и в ед ен н ы е в п р и л о ж ен и и В. о п р е д е л я ю т н е м е н е е д вух р а з в год ил и при н ал и ч и и по­д о з р е н и я . ч то д а н н ы е х а р а кт е р и с т и ки м огли с у щ е с т в е н н о и зм ен ить ся .7 .5 С т о к о в ы е р а с т в о р ы — о б о г а щ е н н ы й о с а д о кО б о га щ е н н ы й о с а д о к с в ы б р ан н о й к о н ц е н т р а ц и е й о б ы ч н о го то в ят д о б а в л е н и е м р а с т в о р а и с ­п ы ту ем о го в е щ е с т в а н е п о с р е д с тв е н н о к о сад ку. С то ко в ы й р а с т в о р и сп ы ту ем о го в е щ е с т в а в д е и о ­н и з и р о в а н н о й вод е с м е ш и в а ю т с и с ку с с тв е н н ы м о с а д ко м н а ро л и ко в о й м е л ь н и ц е , к о р м о с м е с и т е л еил и п е р е м е ш и в а н и е м в ручн ую . Е сл и и с п ы ту е м о е в е щ е с тв о п л о хо р а с тв о р я е тс я в в од е, т о е го м о ж н ор а с т в о р и т ь в м и н и м а л ь н о м о б ъ е м е п о д х о д я щ е го о р га н и ч е с ко го р а с т в о р и т е л я (н а п р и м е р , в ге к с а н е ,а ц е т о н е ил и х л о р о ф о р м е ). П о с л е э то го д а н н ы й р а с т в о р с м е ш и в а ю т с 1 0 г м е л ко го кв а р ц е в о го п е с кад л я ка ж д о го и сп ы ту ем о го с о с у д а . З а т е м р а с т в о р и т е л ь в ы п а р и в аю т д о е го п о л н о го у д а л е н и я из п е с ка ;п е с о к с м е ш и в а ю т с с о о тв етств ую щ и м к о л и ч е с тв о м о с а д к а на ка ж д ы й и сп ы туем ы й со суд . Д л я с о л ю ­б и л и з а ц и и , д и с п е р ги р о в а н и я ил и э м у л ь ги р о в а н и я и сп ы ту ем о го в е щ е с тв а и сп ол ь зую т тол ь ко л е г к о ­л е т у ч и е р а с т в о р и т е л и . С л е д у е т и м еть в виду, ч то ко л и ч е ств о п е с ка , в х о д я щ е е в с м е с ь и сп ы ту ем о гов е щ е с т в а и п е с к а , н е о б х о д и м о уч и ты в а ть п р и п р и го то в л е н и и о с а д к а (т. о. го то в ить о с а д о к с л е д у е т см е н ь ш и м к о л и ч е с тв о м п е с к а ). Д о б а в л я е м о е и с п ы ту е м о е в е щ е с тв о т щ а т е л ь н о и р а в н о м е р н о р а с п р е ­д е л я ю т в о с а д к е . П р и н е о б х о д и м о с ти а н а л и з и р у ю т д о п о л н и т е л ь н ы е пробы д л я о п р е д е л е н и я с т е п е н ио д н о р о д н о с ти . 8 Дизайн испытанияД и з а й н и сп ы та н и я с в я з а н с в ы бо ром к о л и ч е с т в а и д и а п а з о н а р а з н е с е н и я и сп ы ту е м ы х к о н ц е н ­т р а ц и й . к о л и ч е с т в а со суд ов д л я к а ж д о й к о н ц е н тр а ц и и и ко л и ч е с т в а л и ч и н о к н а со суд . О п и сы в аю тд и зай н ы с о п р е д е л е н и е м точ ки Е С . у с та н о в л е н и е м N O E C и о п р е д е л е н и е м д и а п а з о н а п р ед ел ь ны хко н ц е н т р а ц и й .3
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 58.1 Д и з а й н д л я р е г р е с с и о н н о г о а н а л и з а8 .1 .1 Э ф ф е кт и в н а я ко н ц е н тр а ц и я (н а п р и м е р . Е С 15, Е С М ) и д и а п а зо н ко н ц е н тр а ц и й , в которомд е й с т в и е и сп ы ту ем о го в е щ е с тв а п р ед став л я е т и н те р е с , д ол ж ны охв аты вать ко н ц е н тр а ц и и , в кл ю ч ен ­н ы е в и сп ы та ни е. В о б щ е м , точ ность и о с о б е н н о д о сто в е р н о сть , п р и которы х ус танав л и в аю тся э ф ­ф екти в н ы е к о н ц е н тр а ц и и (Е С Х). п ов ы ш аю тся, ес л и э ф ф е кти в н а я ко н ц е н тр а ц и я н ахо д и тся в д и а п а зо н еи сп ы туем ы х ко н ц е н тр а ц и й . С л е д у е т и зб ега ть э кстр а п о л я ц и и зн ач и те л ь н о н и ж е с а м о й низкой д е й с т в у ­ю щ е й ко н ц е н тр а ц и и или в ы ш е с а м о й вы сокой ко н ц е н тр а ц и и . П р е д в а р и те л ь н о е и сп ы тани е п ров о дя т вц е л я х ус та н о в л ен и я д и а п а з о н а д л я вы бо ра исп ол ь зуем ы х ко н ц е н тр а ц и й (см . 9 .1 .4 .1 ).8 .1 .2 Е сл и устанавливаю т значен и е Е С Х, то испытывают н е м е н е е пяти концентраций в трех п овторно­стях д ля каж дой кон ц ентрации. В лю бом сл уч ае используют д остаточно е количество испы туемы х ко н ц ен ­трац и й д ля установления подходящ ей модели. Ко нц ентрац и и н е должны различаться более ч е м в д ва раза(за исклю чением тех случаев, когда кривая зависим ости кон ц ентрация — э ф ф е кт и м еет пологий наклон).Количество повторностей н а каж дую обработку м ожно уменьш ить, если количество испытуемых ко н ц ен ­траций с различны м эф ф ектом является больш им . У в ел ичение количества повторностей или ум ень ш ени ед и а п а зо н а испытуемых концен тр ац и й приводит к суж ению доверительны х интервалов испытания. Еслиопределяю т вы живаемость и рост л ичинок в течени е 10 сут. то необходимы дополнительны е повторности.8 .2 Д и з а й н д л я у с т а н о в л е н и я N O E C /L O E CЕ сл и н еоб ход и м о у становить N O E C /L O E C . т о использую т пять испы туем ы х ко н ц ен тр ац и й не м е н е ечем в четы рех повторностях, и ко н ц ен тр ац и и н е дол ж ны различаться б о л е е чем в д ва раза. Количествоповторностей д о л ж н о быть д остаточны м д ля о б есп еч ени я ад екв атн ой стати сти ческой м о щ н ости д ля вы­явления разницы в р а зм е р е 2 0 % от контроля при 5 % -н о м уровне знач и м ости (р = 0 .0 5 ). Д л я о п р е д е л е ­ния скорости развития об ы чно подходит дисперси о нн ы й а н а л и з (A N O V A ), такой как кри тер и й Д а н н е ттаи критерий В ильямса [1 7 ]-{2 0 ]. Д л я определ ения показателя вы лупления используют критерий К о храна —А р м и т а ж а . точны й критерий Ф и ш е р а (с п оправкой Б о н ф ер р о н и ) и л и критерий М а н те л я — Х е н зе л я .8 .3 О п р е д е л е н и е д и а п а з о н а п р о д е л ь н ы х к о н ц е н т р а ц и йО п р е д е л е н и е д и а п а зо н а предельны х ко н ц ен тр ац и й вы полняется (одна исп ы туем ая кон ц ен тр ац и яи контроль), ес л и н икаки е э ф ф е кты н е бы ли выявлены в п ред варител ьном уста н ав л и в аю щ ем д и а п а зо ниспы тании. Ц елью о п р е д ел ен и я д и а п а зо н а пред ел ьны х ко н ц ен тр ац и й является п ров еден и е испы танияпри достаточно высокой кон ц ен тр ац и и , чтобы отв етств ен ны е исполнители могли исклю чить возможны етокси ч ески е эф ф екты в ещ ес тв а и установить пред ел ьную кон ц ен тр ац и ю , п о я в л е ни е которой н е п ред ­п ол агаю т в р еал ь ной с и туац и и . Р еко м енд уе тс я кон ц ен тр ац и я 1 0 0 0 м г/кг (сухая м а с с а ). И спользую т нем е н е е ш ести повторностей н а каж д ую о б р аб о тку и контроль. Д о л ж н а быть п о казан а ад екв атн ая с т а т и ­сти че ская м о щ н о сть д л я вы явления разницы в р а зм е р е 2 0 % от контрол я при 5 % -н о м уровне значим ости(р = 0 .0 5 ). Д л я д ан н ы х по м етр и ч ес ко м у э ф ф е кту (скорость разв и ти я и м а с с а ) уста н о в л ен и е (-критерияявляется подход ящ им стати сти чески м м етодом , ес л и д ан н ы е отвечаю т тр еб о в ан и я м д ан н о го критерия(н о р м ал ь н о е расп р ед ел ен и е , од нородность д ис пе р си и ). Е сл и ука занн ы е треб ов ан и я н е выполнены, тоиспользую т (-критерий с различны м и д исперси я м и или непарам етр и чо схи й кри терий, тако й ка к критерийВ и лко ксо и а — М а н н а — Уитни. Д л я д анны х по п оказателю вы лупления подходит точный критерий Ф и ш е р а. 9 Проведение испытания9.1 У с л о в и я и с п ы т а н и я9 .1 .1 П о д г о т о в к а с и с т е м ы о б о г а щ е н н ы й о с а д о к — в о д а9 .1 .1 .1 Д л я в н е сен и я и сп ы туем о го в е щ е с тв а использую т п р о ц е д ур у о б о га щ е н и я , оп и сан н у ю вруков о дств е О Э С Р 2 0 7 « О п р е д е л е н и е остр ой токси ч но сти д л я д о ж д ев ы х че р в ей » (1 4 ]. О б о га щ е н н ы ео с ад ки п о м е щ а ю т с я в сосуды и д о б а в л я ю т н ад о сад о ч н у ю воду с п о л уч е н и ем о б ъ ем но го со о тн о ш е н и яо с ад о к:в о д а 1 :4 (с м . 7.1 и 7 .4 ). В ы со та сл о я о с а д к а д о л ж н а н ахо д и ть ся в п р е д е л а х 1 . 5 - 3 с м . Д л я п р ед у­п р е ж д е н и я р а зд е л е н и я ко м п о н ен то в о с а д к а и р е сус п ен д и р о в ан и я м ел ки х ч а с т и ц во в р е м я д о б а в л ен и яи сп ы туем о й воды в водную колонку, о с а д о к покры ваю т пласти ко в ы м д и с ко м и воду вы ливаю т н а него,и п о сл е этого д и с к с р а з у ж е удаляю т. П о д х о д я т т а к ж е д р у ги е устр ой ств а.9 .1 .1 .2 Испытуемые сосуды покрывают, например, стеклянными пластинками. Если необходимо, то вовремя испытания уровень воды доводят до первоначального объема д ля компенсации потери воды за счет ис­парения. Д л я п редупреждения отложения солей используют дистиллированную или деионизированную воду.4
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 59 .1 .2 С т а б и л и з а ц и яП о с л е п ри готов л ен и я о б о га щ е н н о го о с а д к а с н ад о с а д о ч н о й водой т р еб уется о б е с п е ч и ть п рон и к­н о в е н и е и сп ы туем о го в е щ е с тв а из о с а д к а в водную ф а з у [3]. [4]. [6 ]. [1 3 ]. П р е д п о ч ти те л ь н о э то п роводятпри т е м п е р а т у р е и а э р а ц и и , и спол ьзуем ы х при исп ы тани и . С о о тв е тс тв у ю щ е е в рем я у р а в н о в еш и в а н и яяв л я ется с п е ц и ф и ч е с ки м д л я о с а д к а и хи м и ч еско го в е щ е с тв а и м о ж е т н ахо д и ть ся в п р е д е л а х от н е ­ско ль ки х ч а с о в д о суто к, а в редки х сл у ч а я х д о н еско л ь ки х н ед ел ь ( 4 - 5 н е д ). П о ско л ь ку з а это в рем ям о ж е т прои зой ти д е гр а д а ц и я м ногих хи м и ч ески х в ещ ес тв , т о н е о ж и д а ю т око н ч ан и я ур ав н о в еш и в а н и я ,но р е ко м е н д у е м ы й п ер и о д ур ав н о в еш и в а н и я об ы чн о с о став л я е т 4 8 ч . В ко н ц е этого д о по л н и тел ь н огоп ер и о д а у р ав н о в еш и в а н и я оп р е д ел я ю т к о н ц е н тр а ц и ю и спы туем ого в е щ е с тв а в н ад о сад о ч н о й ж и д к о ­сти . поро в ой вод е и о с а д к е по м е н ь ш е й м е р е при с а м о й вы сокой к о н ц е н тр а ц и и и п р и од ной б о л е ен изко й к о н ц е н тр а ц и и (см . 9 .3 .1 .1 ). Д а н н ы е а н а л и ти ч е с к и е и з м е р е н и я и сп ы туем о го в е щ е с тв а позволяю тр а ссч и та ть м ассовы й б а л а н с и в ы рази ть результаты н а осно в е уста н о в л ен н ы х ко н ц ен тр ац и й .9 .1 .3 В н е с е н и о т е с т о в ы х о р г а н и з м о в9 .1 .3 .1 З а 4 - 5 с у т д о в н е с е н и я тесто в ы х о р ган и зм о в в и сп ы ту ем ы е сосуды о тб и р аю т кл ад ки яи циз культур и п о м е щ а ю т в н е б о л ь ш и е сосуды с кул ьтуральной ср ед о й . И спо ль зую т в ы д е р ж а н н ую ср ед уиз и сход н ой культуры или св еж еп р и го то в л ен н у ю среду. П р и и сп ол ь зо в ани и п о сл ед н ей в кул ь тураль ­н ую с р е д у д обавл я ю т н е б о л ь ш о е ко л и че ств о ко р м а , н а п р и м е р зе л е н ы е водоросли и /и л и несколькока п е л ь ф и л ь трата м е л ко и зм ел ь чен но й сусп е н зи и хл оп ь ев и д н ого ко р м а д л я ры б (см . п р и л о ж е н и е А ).И спо ль зую т тол ь ко н ед а в н о о тл о ж е н н ы е кл ад ки яи ц . О б ы ч н о л и чи нки н ачи н аю т вы л упл яться ч е р е зп а р у с у то к п о с л е кл ад ки ( 2 - 3 с у т — Chironomus riparius при 2 0 °С , 1 - 4 сут — Chironomus tentans при2 3 °С и Chironomus yoshimatui при 2 5 ЭС ), и ро ст л и чи н о к п роисход ит в ч е ты р е с та д и и р а зв и ти я, ка ж д а яп род ол ж и тел ь н ость ю 4 - 8 сут. В и сп ы тани и использую т л и чи н о к первой стад и и ра зв и ти я ( 2 - 3 ил и 1 - 4с у т п о сл е в ы л упл ен и я ). С т а д и ю ра зв и ти я ко м ар о в о п р е д е л я ю т по ш и р и н е головной кап сул ы [6 ].9 .1 .3 .2 В каж ды й испы туемы й сосуд, с о д е р ж а щ и й о б огащ енн ы й о с а д о к и воду, произвольно вносят2 0 личинок п ервой стадии развития, используя п ипетку с тупы м кончиком. А эр ац и ю воды останавливаю т воврем я внесения личинок в испы туемы е сосуды и е щ е на 2 4 ч п осл е этого (см . 9 .1 .3.1 и 9 .1 .8 .1 ). С огл асно вы­б р ан ном у д и зай н у испы тания (см. 8 .1.2 и 8 .2 .1 ) количество используемых личинок н а каж дую концентрациюсоставляет не м о нео 6 0 д ля установления точки Е С и не м ен ее 8 0 д ля установления N O E C .9 .1 .4 И с п ы т у е м ы е к о н ц е н т р а ц и и9 .1 .4 .1 И с п ы та н и е по п одбору д и а п а з о н а ко н ц ен тр ац и й н ео б хо д и м о д л я о п р е д е л е н и я д и а п а зо н апред ел ь ны х ко н ц е н тр а ц и й в ко н еч н о м исп ы тани и . Д л я этой ц ел и использую т р я д ш и р о ко разн есе н н ы хк о н ц е н тр а ц и й и сп ы ту ем о го в е щ е с тв а . Д л я о б е с п е ч е н и я о д и на ко в о й п ло тн ости хи р о н о м и д н а п о в е р х н о ­с т и , и сп ол ь зуем ой д л я конечного и сп ы тани я , хи р он ом и д ы п од в ергаю т в оздей ств ию к а ж д о й ко н ц е н т р а ­ц и и и спы туем ого в е щ е с тв а в т е ч е н и е п ер и о д а в р е м е н и , п о зво л я ю щ его ус та н о в и ть со отв етств ую щ иеи сп ы ту ем ы е ко н ц е н тр а ц и и , и д л я этого н е т р еб уется повторн ости .9 .1 .4 .2 И с п ы туе м ы е к о н ц е н тр а ц и и д л я конечного оп ы та о п р е д е л я ю т н а о с н о в е результатов испы ­т а н и я по п одбору д и а п а з о н а ко н ц е н тр а ц и й . И спо ль зую т и вы би р аю т н е м е н е е п яти ко н ц е н тр а ц и й , како п и с а н о в 8 . 1. 1- 8 .2 .1.9 .1 .5 К о н т р о л иВ и с п ы та н и е в кл ю чаю т кон трол ь ны е сосуд ы , н е с о д е р ж а щ и е и сп ы туем о го хи м и ч еско го в е щ е с тв а ,но с о д е р ж а щ и е о с ад о к, при со о тв етств ую щ ем ко л и ч е ств е п ов торн ос те й (см . 8 .1 .2 - 8 .2 .1 ) . В том с л у ч а е ,е с л и и спол ьзован раств о р и тел ь д л я в н е сен и я и сп ы туем о го в е щ е с тв а (см . 7 .5 .1 ). с л е д у е т д о б а в и ть ко н ­трол ь н а раств о р и тел ь с о с ад ко м .9 .1 .6 Т е с т -с и с т е м аИ спо ль зую т с та т и ч е с ки е си стем ы . В и скл ю чи тел ь ны х сл у ч а я х использую тся п о л устати чес ки е илипроточны е си с тем ы с п ер и о д и че ски м ил и постоя н ны м о б н о в л е н и е м н ад о сад о ч н о й воды, н а п р и м е р ,е с л и п о казател и ка ч е с тв а воды стан о в я тся непр и год ны м и д л я тесто в о го о р га н и зм а , ил и н а р у ш а е т с ях и м и ч е с ко е р а в н о в е с и е (н а п р и м е р , уровни р а с тв о р е н н о го ки сл ор од а п ад а ю т с л и ш ко м низко, ко н ц е н ­т р а ц и я вы деленн ы х продуктов п о в ы ш а етс я с л и ш ко м вы соко ил и м и н е р а л ь н ы е в е щ е с тв а вы мы ваю тсяиз о с а д к а и влияю т на з н а ч е н и е p H и /и л и ж е с тко с т ь воды ). О д н а к о подход ят и м о гут бы ть п р е д п о ч ти ­тел ь н ы м и д р у ги е м етоды у л уч ш ен и я ка ч е с тв а н ад о с а д о ч н о й воды, т а ки е ка к а э р а ц и я .9 .1 .7 К о р мЛ и ч и н о к к о р м я т п ред по чти те л ь н о каж д ы й д е н ь ил и не м е н е е тр е х р а з в н е д е л ю . Ко рм д л я рыб (с у ­с п е н з и я в в о д е ил и м е л к о и з м е л ь ч е н н ы й к о р м , н а п р и м е р T e tr a -M in ил и T e tra -P h y ll: п о д р о б н о е о п и ­с а н и е см . в п р и л о ж е н и и А ) в ко л и ч е ств е 0 , 2 5 - 0 , 5 м г ( 0 ,3 5 - 0 ,5 м г д л я С. yoshimatui) н а л ичинку в суткияв л я ется д о статоч ны м д ля л и чи н о к р а н н е го в о зр а ста в т е ч е н и е п ерв ы х 1 0 сут. Н е м н о го б о л ь ш е кор м а5
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5тр еб уется д л я л и ч и н о к б о л е е с т а р ш е го в о зр а ста: 0 ,5 - 1 м г н а л и ч и н ку в сутки я в л я е тся д о статоч ны м д ляо с та л ь н о го п ер и о д а и сп ы тани я . Ко л и ч еств о ко р м а сн и ж аю т во всех о б р а б о т ка х и ко н тр о л е, е с л и о т м е ­чен рост грибов или в ко н тр о л е н аб л ю д а ется ги бел ь л и чи но к. Е сл и н ев о зм о ж н о о с та н о в и ть р о ст грибов,то и сп ы та н и е повторяю т зан о в о . П р и и спы тании в е щ е с тв с вы сокой ад с о р б и р у ю щ е й способн ость ю (н а ­п р и м ер , с log К ОЛ. > 5 ) ил и в ещ ес тв , ко в а л е н тн о св я зы в аю щ и хся с о с ад ко м , ко л и че ств о ко р м а, н е о б х о ­д и м о е д л я о б е с п е ч е н и я в ы ж и в аем ости и е с т е с т в е н н о го р о ста ор ган и зм о в , д о б а в л я ю т к и ску сств ен но м уос ад ку д о п ер и о д а с т а б и л и з а ц и и . Д л я этого использую т р а сти те л ь н ы й м а т е р и а л в м ес то ко р м а д ля рыб,н а п р и м е р д о б а в л я ю т 0 .5 % (с у х а я м а с с а ) м ел ко и зм ел ь чен ны х л и сть е в ж гу ч е й крапивы ( Urtica dioeca),ш ел ко в и цы (M ow s alba), кл е в е р а пол зуч его или б е л о го (Trifolium repens), ш п и н а та ( Spinacia oleracea)ил и д руго го р а сти те л ь н о го м а т е р и а л а ( Cerophyl и л и а о тф а -ц е л л ю л о за ).9 .1 .8 У с л о в и я и н к у б а ц и и9 .1 .8 .1 П р о в о д я т л е гко е а э р и р о в а н и е н ад о с а д о ч н о й воды в и сп ы туем ы х с о с у д а х п ред по чти тель н ов т е ч е н и е 2 4 ч п о сл е в н е с е н и я л и чи н о к и п р о д о л ж аю т в т е ч е н и е в сего и сп ы та ни я (с л е д у е т собл ю датьо с то р о ж н о сть в о тн о ш е н и и того , ч то ко н ц е н тр а ц и я р а с т в о р е н н о го ки сл ор од а н е д о л ж н а с н и ж ать ся н и ж е6 0 % A S V ). А э р а ц и ю п ров о дят ч е р ез сте кл я н н у ю пастеро в скую пипетку, заф и кси р о в ан н ую н а 2 - 3 смв ы ш е сл о я о с а д к а (т. е . один или н еско л ь ко п узы р ь ков /сек). В с л у ч а е исп ы тани я л етуч и х х и м и ч ески хв е щ е с тв аэ р а ц и ю си стем ы о с а д о к — вод а н е проводят.9 .1 .8 .2 И с п ы тан и е п ров о дя т при п остоянно й т е м п е р а т у р е (2 0 ± 2 ) вС . Д л я С. tentas и С. yoshimatuiр е ко м е н д ую тся те м п е р а ту р ы со о тв етств ен н о (2 3 ± 2 ) °С и (2 5 ± 2 ) °С . И спо ль зую т 1 6 -ча со в о й световойп ер и о д , и и н тен си в н о сть св е та д о л ж н а с о став л я ть о т 5 0 0 д о 1 0 0 0 лк.9 .1 .9 П р о д о л ж и т е л ь н о с т ь в о з д е й с т в и яВ о з д е й с тв и е н ач и н а е тс я с в н е сен и я л и чи н о к в о б о га щ е н н ы е и ко н трол ь ны е сосуды . М а кс и м а л ь н а яп род о л ж и тел ь н о с ть воздей ств ия с о с т а в л я е т 2 8 сут д л я С. riparis и С. yoshimatui и 6 5 сут д л я С. tentas.Е сл и ком ары вы лупляю тся р а н ь ш е , то и сп ы та н и е м о ж н о зако н ч и ть м и н и м ум ч е р е з 5 с у т посл е вылу-п л ен и я п о с л е д н е й в зрослой о с о б и в кон трол е.9 .2Н а б л ю д е н и я9 .2 .1 В ы л у п л о н и е9 .2 .1 .1 О п р е д е л я ю т в р е м я вы л упл ен и я и о б щ е е ко л и че ств о полностью вы лупивш ихся ко м ар о в(с а м ц о в и с а м о к). С а м ц о в л е гко о п р е д е л и ть по их п ер и сты м уси кам .9 .2 .1 .2 И спы туем ы е сосуды осм атриваю т не м е н е е трех раз в н ед ел ю д л я визуальной о ц енки любогоан ом ал ь н ого пов ед ени я (н ап р и м ер , выход из о с ад ка, ан о м а л ь н о е п л ав а н и е) по ср ав не ни ю с контролем .В п ери о д п ред по л а гаем о го вы лупления еж е д н е в н о подсчиты ваю т количество вы лупивш ихся ком аров.Каж ды й д ен ь оп редел яю т пол и кол ичество полностью вы лупивш ихся ком аро в . П о сл е и д е нти ф и кац и иком аро в и звл екаю т из сосудов. Р еги стри р ую т л ю бы е кл ад ки яиц. о с та ю щ и е с я д о о ко нчан и я испы тания, азатем их удаляю т д л я п р ед уп р еж д ен и я повторного в н есен и я л и чи но к в осад ок. Т а к ж е р егистрирую т числовидим ы х н евы лупивш ихся куколок. Руководство по о п ред ел ен и ю вы лупления п ри в ед ено в п ри л о ж ен и и Г.9 .2 .2 Р о с т и в ы ж и в а е м о с т ьЕ сл и п ред став л яю т д а н н ы е по в ы ж и в аем ости и р о сту л и ч и н о к за п ерв ы е 1 0 сут. т о в н а ч а л е и сп ы ­та н и я в о б щ е е ч и с л о и сп ы туем ы х со суд ов в кл ю чаю т д о п о л н и тел ь н ы е сосуды , чтобы их м о ж н о б ы л о и с ­пользовать в д а л ь н е й ш е м . О с а д о к и з э ти х д опо л н и тел ь н ы х с о суд ов п р о с еи в аю т ч е р е з с и то с р а зм е р о мо тв ер сти й 2 5 0 м км . которое з а д е р ж и в а е т л и чи нки . П о к а з а т е л я м и гибели л и ч и н о к яв л я ется н е п о д в и ж ­н ость и о тсу тс тв и е р е а кц и и н а м е х а н и ч е с ко е р а з д р а ж е н и е . Т а к ж е подсчиты ваю т ко л и че ств о ли чи но к,которы х н е уд ал о сь о б н а р уж и ть , и их о тн о ся т к м ер твы м (л и чи н ки , кото ры е погибли в н а ч а л е и с п ы та ­ния. м о гли п одв ергнуть ся м и кр о б н о м у р а зл о ж е н и ю ). О п р е д е л я ю т (б еззо л ь н ую ) сухую м а с с у вы жив­ш и х л и чи н о к н а испы туем ы й со суд и р а ссч и ты в аю т ср ед н ю ю и нд и в и д уал ь н ую сухую м ас су н а сосуд.Р еко м е н д у е тс я о п р е д ел и ть в озра ст в ы ж ивш их л и чи но к; д л я э то го и зм ер я ю т ш и р и н у головной капсулыу ка ж д о й осо б и .9 .3 А н а л и т и ч е с к и е о п р е д е л е н и я9 .3 .1 К о н ц е н т р а ц и я и с п ы т у е м о г о в е щ е с т в а9 .3 .1 .1 П е р е д н а ч а л о м и сп ы та ни я (т. е . п е р е д в н е с е н и е м л и ч и н о к) о тб и р аю т пробы о б ъ ем но гоо с а д к а н е м е н е е ч е м из од но го о б р а б о т а н н о го со суд а д л я ан а л и ти ч е с ко го о п р е д е л е н и я ко н ц ен тр ац и ии сп ы туем о го в е щ е с тв а в о с а д ке . В н а ч а л е исп ы тани я ан а л и зи р у ю т как м и н и м ум пробы н ад о сад о ч н о йводы, поровой воды и о с а д к а (с м . 9 .1 .2 ), а в ко н ц е исп ы тани я а н а л и зу п о д в е р га ю т у ка за н н ы е пробытолько при с а м о й вы сокой к о н ц е н тр а ц и и и при од но й б о л е е низкой ко н ц е н тр а ц и и . Р езультаты оп ред е- 6
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5л е н и я к о н ц е н тр а ц и и и спы туем ого в е щ е с тв а п р ед о став л я ю т и н ф о р м ац и ю о п о в е д е н и и /р а с п р е д е л е н и ии сп ы туем о го в е щ е с тв а в си с те м е вод а — о сад ок.9 .3 .1 .2 П р и п ров е д ен и и п р о м еж уто ч н ы х и з м е р е н и й (н а п р и м е р , на 7 -е с у т) и ес л и д л я а н а л и з атреб ую тся б о л ь ш и е пробы , кото ры е н ев о зм о ж н о о то б р ать из и сп ы туем ы х сосудов, н е н ар у ш и в т е с т -си стем у. а н а л и ти ч е с к и е и з м е р е н и я п ров о дят н а п роб ах из д о п о л н и тел ь н ы х и сп ы туем ы х сосудов, п од ­го то в лен ны х ан а л о ги ч н ы м о б р а з о м (в кл ю чая п ри сутств и е тесто в ы х о р га н и зм о в ), но н е исп ол ь зуем ы хд л я б и о л о ги чес ки х н аб л ю д е ни й .9 .3 .1 .3 Д л я в ы д е л е н и я поровой воды р е ко м е н д у е тс я п роводить ц ен тр и ф у ги р о в ан и е , н а п р и м е рпри 1 0 0 0 0 g и 4 “С в т е ч е н и е 3 0 м и н . О д н а к о е с л и и сп ы ту ем о е в ещ ес тв о н е а д с о р б и р у е тс я н а ф и ль трах,т о д о п у сти м о ф и л ь тр о в ан и е . В н екотор ы х с л у ч а я х н ев о зм о ж н о о п р е д е л и ть к о н ц е н тр а ц и ю и спы туем о гов е щ е с тв а в поровой в од е, поско ль ку р а з м е р пробы яв л я ется с л и ш ко м м ал ен ь ки м .9 .3 .2 Ф и з и к о -х и м и ч е с к и е п о к а з а т е л иИ зм е р я ю т p H и те м п е р а ту р у исп ы туем ы х со суд ов со о тв етств ую щ и м о б р а з о м (см . 6 ). В н а ч а л е ико н ц е и сп ы та ни я о п р е д е л я ю т ж е с тко с т ь воды и с о д е р ж а н и е а м м и а к а в контрольны х со с у д а х и в одноми сп ы ту ем о м со суд е с с а м о й вы сокой к о н ц е н тр а ц и е й . 10 Данные и отчет о проведении испытания1 0 .1 О б р а б о т к а р е з у л ь т а т о в1 0 .1 .1 Ц е л ь ю д а н н о го и сп ы та ни я яв л я ется о п р е д е л е н и е вл ияния и сп ы туем о го в ещ ес тв а н а ско­рость ра зв и ти я и о б щ е е чи сл о полностью вы л упи в ш ихся ком аро в (с а м ц о в и с а м о к) и л и . в с л у ч а е п р ов ед ен и я и сп ы та ни я по о ц е н к е э ф ф е к т а в т е ч е н и е 1 0 сут. — н а в ы ж и в аем ость и м а с с у л и чи но к. Е сл и о т ­сутств ую т св е д ен и я о стати сти че ски д о сто в е р н о й разл и чн о й пол овой чув ств ител ь но сти , то результатыпо с а м ц а м и с а м ка м об ъ еди няю т д л я стати сти ч е ско го а н а л и з а . Р а з л и ч и я в п ол овой чувствител ьностим о ж н о о п р е д е л и ть с тати сти ч е ски , н а п р и м е р в т а б л и ц е и сп ы та ни я ■/} - г - 2 . П р и н е о б хо д и м о с ти ч е р е з1 0 сут оп р е д ел я ю т в ы ж и в аем ость л и ч и н о к и ср ед ню ю и нд и в и д у ал ь н ую сухую м а с с у на од ин сосуд.1 0 .1 .2 Э ф ф е кт и в н ы е ко н ц е н тр а ц и и , в ы р а ж ен н ы е по сухой м а с с е , п ред по чти те л ь н о рассчиты ватьна осно в е уста н о в л ен н ы х к о н ц е н тр а ц и й в о с а д ке в н а ч а л е и сп ы та ни я (см . 9 .3 .1 .1 ).1 0 .1 .3 Д л я р а с ч е та точки Е С 50 ил и д руго й Е С Х исп ол ь зую т стати сти ку н а со суд в ка ч е с тв е ф а к т и ­ч е с ки х п о в то р н о с те й . П р и р а сч е те д о в ер и тел ь н о го и н т е р в а л а д л я л ю бой Е С Х учи ты в аю т в а р и а б е л ь ­н ость м е ж д у со суд ам и , ил и е ю м о ж н о п р ен еб р еч ь , ес л и д о к а з а н о , ч то э та в ар и аб ел ь н о сть являетсян езн ач и те л ь н о й . П р и о п р е д е л е н и и м о д ел и м ето д о м н а и м е н ь ш и х кв ад рато в п ров о дят п р е о б р а зо в а н и е вст а т и с т и ку на со суд д л я п ов ы ш е ни я о д но ро д н ости д и с п е р с и и . З н ач ен и я Е С Х р а ссч и ты в аю т п о сл е п р е ­о б р а з о в а н и е э ф ф е к т а в и сход н ое зн ач ен и е.1 0 .1 .4 Е сл и стати сти ч е ски й а н а л и з осно в ан на о п р е д е л е н и и N O E C /L O E C п у те м пров ерки ги п о­тезы . т о с л е д у е т учиты вать в ар и а б е л ь н о с ть м е ж д у со суд ам и , н а п р и м е р « и е р а р х и ч е с ки м » A N O V A .А л ь тер н а ти в н о п о д х о д я щ и м и являю тся б о л е е ош и б ко у сто й ч и в ы е кр и тер и и [2 1] в те х си т у а ц и я х , когдаи м ею тся н а р у ш е н и я обы чны х п р ед п о л о ж ен и й A N O V A .1 0 .1 .5 П о к а з а т е л ь в ы л у п л е н и я1 0 .1 .5 .1П о ка з а т е л и вы л упл ен и я являю тся д и с кр е тн ы м и д а н н ы м и , и их м о ж н о ан ал и зи р о в ать сп о м о щ ь ю кри тер и я К о х р а н а — А р м и т а ж а . п р и м ен ен н о го п о ш а го в о , гд е п р е д п о л а га е т с я м о н о то н н аяз а в и си м о сть «ко н ц е н т р а ц и я — э ф ф е к т» , и эти д а н н ы е с о в п а д а ю т с э ти м п р е д п о л о ж е н и е м . В п р о ти в ­н ом с л у ч а е и с п о л ь зу ю т то ч н ы й к р и т е р и й Ф и ш е р а и л и кр и т е р и й М е н т е л я — Х е н з е л я с п о п р а в ко йБ о н ф е р р о н и — Х о л м а p-з н а ч е н и й . Е сл и и м ее тс я д о казател ь ств о б о л ь ш о й в а р и аб ел ь н о сти м е ж д у по­в то р н о с тя м и в од но й и той ж е ко н ц е н тр а ц и и , ч то ука зы в а ет на б и н о м и н а л ь н о е р а с п р е д е л е н и е (ч астоотн о си тся к «э кс тр а б и н о м и и а л ь н о й » в ар и а ц и и ), т о тогд а использую т ро бастн ы й кр и тер и й К о х р а н а —А р м и т а ж а и точны й кр и тер и й Ф и ш е р а , н а п р и м е р , п р ед л о ж ен н ы й в [21].О п р ед ел я ю т с ум м ар но е кол ичество вы лупивш ихся к ом аро в н а со суд л . и д ел я т н а ч и сл о внесенны хл и ч и н о к л ,Е Я = ^ ,( 1)п'»гд е ER — п о ка за те л ь вы л упл ен ия.лв — ч и с л о вы л упивш ихся ко м ар о в н а сосуд:п3 — чи сло внесенны х л и чи но к на сосуд.7
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 51 0 .1 .5 .2 А л ь тер на ти в о й , кото рая н а и б о л е е п одход и т д л я бо л ь ш и х вы борок п роб при н а л и ч и и экс-т р а б и н о м и н а л ь н о й д и с п е р с и и , яв л я ется о б р аб о тка п о ка з а т е л я вы л упл ен и я в в и д е п остоянно го э ф ф е к ­т а и и сп о л ь зо в ани е т а ки х м ето дов , к а к кр и те р и й В и л ь я м са, е с л и п р ед п о л а гается м о н о то н н ая з а в и с и ­м о сть ко н ц е н тр а ц и я — э ф ф е к т и с о в п а д а е т с д а н н ы м и ER. П р и о тсутствии м о н о то н н о сти подход иткр и тер и й Д а н н е т а . Б о л ь ш ая вы бо рка проб о з н а ч а е т в д а н н о м с л у ч а е кол и честв о вы л упи в ш ихся л и ч и ­н о к и кол и честв о н ев ы л упи в ш и хся л и ч и н о к в о б о и х сл у ч а я х в б о л е е пяти п о в торн остя х (со су д ах ).1 0 .1 .5 .3 Д л я п р и м ен ен и я методов A N O V A знач ен и я Е Я в н а ч а л е подвергаю т п рео бразо в ани ю «а р кс и ­н ус — квадратны й корень» или прео бразо в ани ю по м ето ду Тью ки — Ф р и м а н а д ля получения примерногон орм ального ра сп р ед ел ен и я и урав ни в ани я д исперси й . П р и использовании абсолю тны х ч а сто т п р и м е н я ­ю т критерий К о хр а н а — А р м и т а ж а . точны й кри тер и й Ф и ш е р а или М е н те л я — Х е н зе л я . П р ео б р а зо в ан и е«ар кси н ус — квадратны й кор ен ь » рассчиты ваю т ка к ар кси н ус {синус 1) о т кв ад ратного корня ER.10 .1.5.4 Д ля показателей вылупления рассчитывают значения Е С Х, используя регрессионный анализ(или например, пробит [22]. логит, анал и з Вейбулла. подходящ ее программ ное обеспечение и т. п.). При н е ­возможности п рименения регрессионного а н ал и за (наприм ер, при наличии м ен ее двух частичны х эф ф ектов)используют другие неларам етричесхие методы, такие как скользящ ее сред нее или простая интерполяция.1 0 .1 .6 С к о р о с т ь р а з в и т и я10 .1 .6 .1 С р е д н е е в рем я разв и ти я п ред став л яет со бой сред ний в рем ен но й и нтер в ал м еж д у в н е с е ­н и е м личинок (сутки 0 и спы тания) и в ы л упл ением опы тной группы ком аров. Д л я расчета ф акти ческогов р е м ен и разв и ти я учиты ваю т возраст л и чи но к на в рем я внесен и я. С кор ость развития является обратнойвеличиной в рем ен и разв и ти я (еди н иц а: 1/с у т ) и п ред став л яет скорость разв и ти я личинки, кото рое и м е ­ет м есто в сутки. С кор ость разв и ти я пред почтительна д ля о ц енки д анн ы х испы таний по токсичности сосад ком , поскольку его д и с п е р си я н и ж е и д а н н ы е являю тся б о л е е однородны м и и б л и ж е к н о р м ал ь н ом урасп р ед ел ен и ю по ср ав не ни ю со в р е м ен ем разв и ти я. С ле д о в ател ь н о , д л я о ц енки скорости разв и ти я и с ­пользую т м о щ н ы е п ар а м етр и ч е ски е критерии, но не д л я в р е м ен и развития. Д л я скорости развития в видепостоянного э ф ф е к та знач ен и я Е С х устанав л и в аю т с использованием р е гр е сси он н ого а н а л и за (23), (24).1 0 .1 .6 .2 Д л я с л е д у ю щ и х с тати сти ч е ски х т е с т о в ко л и че ств о ком ар о в , н а б л ю д а е м о е при и спы таниина сутки х. п р и н и м а ю т за ко л и ч е ств о вы л упи в ш ихся ко м ар о в н а ср ед ни й в р е м е н н о й и н т е р в а л м е ж д ус у тка м и х и с у тка м и х - / ( / = д л и н а и н те р в а л а м е ж д у о п р е д е л е н и я м и , об ы чн о 1 с у т). С р е д н ю ю скоростьра зв и ти я на сосуд, х . р а ссч и ты в аю т по ф ор м ул еЬх>х * Z /T) 1-1 (2)п е 'где: х — с р ед н я я скорость ра зв и ти я н а сосуд;i — интер в ал м еж д у оп редел ен и ям и ;т — м акси м ал ь но е чи сло и нтер в ал ов м еж д у определ ениям и;/( — ч и с л о вы л упи в ш ихся н асеко м ы х в и н те р в а л е м е ж д у о п р е д е л е н и я м и г.пе — о б щ е е количество вы лупивш ихся н асеком ы х в кон ц е испы тания (= £ /');х — ско ро сть ра зв и ти я вы лупивш ихся н асеко м ы х в и н т е р в а л е м еж д у о п р е д е л е н и я м и /.(3 )где: сут, — сутки о п р е д е л е н и я (сутки п о с л е внесен ия);— д л и н а и н т е р в а л а м еж д у о п р е д е л е н и я м и i (сут. об ы чно 1 су т).1 0 .2О т ч е т о п р о в е д е н и и и с п ы т а н и яО т ч е т о п р о в е д ен и и и сп ы та ни я д о л ж е н с о д е р ж а т ь с л е д ую щ ую и нф о рм ац и ю :1 0 .2 .1 И с п ы ту е м о е в ещ ес тв о :- ф и зи ч е с ка я п р и ро д а и при н ео б хо д и м о с ти ф и зи ко -х и м и ч е с ки е св о й ства (р аств о р и м о сть в воде,д а в л е н и е п ар а , ко э ф ф и ц и е н т р а с п р е д е л е н и я в почве (и л и в о с а д к е , ес л и т а ки е д а н н ы е и м е ю тс я ), с т а ­би л ь но сть в воде и т. п.);- д а н н ы е по х и м и ч е с к о й и д е н т и ф и к а ц и и (о б щ е е н а з в а н и е , с т р у к ту р н а я ф о р м у л а , н о м е р C A Sи т. п .), вклю чая чи с то ту и а н а л и ти ч е с ки й м ето д ко л и че ств ен н о го о п р е д е л е н и я и сп ы туем о го в ещ ес тв а.1 0 .2 .2 В и д т есто в о го о р ган и зм а :- и спол ьзуем ы е тестов ы е организмы : вид. н ауч н о е н азв а ни е, источник о р ган и зм о в и условия куль­тивирования, 8
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5- и н ф о р м а ц и я по о б р а щ е н и ю с к л а д к а м и я и ц и л и чи нкам и ;- в озраст тестов ы х о р ган и зм о в при в не сен и и в и с п ы ту ем ы е сосуды.1 0 .2 .3 У сл о в и я испы тания:- и сп ол ь зуем ы й о с ад о к, т. е . п риродны й ил и искусств ен ны й осадок;- д л я при ро дн ого о с а д ка : источни к и о п и с а н и е м е с та о т б о р а п роб о с а д к а , в кл ю чая по в о зм о ж н о ­с т и и стор и ю загр я зн е н и я ; х а р актер и сти ки : p H . с о д е р ж а н и е о р ган и ч ес ко го у гл е р о д а , с о о т н о ш е н и е C /N игр ан у л о м етр и я (п р и н еоб ход и м ости );- п р и го то в л ен и е искусств ен но го о с а д к а , ко м по нен ты и х а р а кте р и с ти ки (с о д е р ж а н и е о р га н и ч е с ко ­го угл ер о д а, p H . в л аж но сть и т. п. в н а ч а л е и сп ы тани я);- п одготов ка и сп ы туем о й воды (е с л и использую т в о с стан о в л е н н ую воду) и х а р а кте р и с ти ки (к о н ­ц е н тр а ц и я ки сл о р о д а. pH . пров о ди м о сть , ж е с тко с т ь и т. п. в н а ч а л е и сп ы тани я);- в ы со та слоя о с а д к а и м ад осад очн ой воды;- об ъ ем н ад о сад о ч и о й воды и поро в ой воды; м а с с а в л аж но го о с а д к а с и б е з поровой воды;- и с п ы ту ем ы е сосуды (м а те р и а л и ра зм е р);- м ето д п ри готов л ен и я стоковы х раств о р о в и и сп ы туем ы х ко н ц ен тр ац и й ;- в н е с е н и е и сп ы туем о го в ещ ес тв а: и сп ол ь зуем ы е и с п ы ту ем ы е к о н ц е н тр а ц и и , ко л и че ств о п ов тор­н о с те й и п р и м е н е н и е ра ств о р и тел я (п ри н еоб ход и м ости );- усло в ия и нкуб ац и и : т е м п е р а ту р а , световой ц икл и и нтен си в н ость , а э р а ц и я (ч а с т о т а и и н те н с и в ­ность):- п о д р о б н а я и н ф о р м а ц и я о ко р м л ен и и , в кл ю чая тип ко р м а, е го подготовку, ко л и че ств о и ре ж и мко р м л ен и я .1 0 .2 .4 Результаты :- н о м и н ал ь н ы е и сп ы ту ем ы е ко н ц е н тр а ц и и , у с та н о в л ен н ы е и сп ы ту ем ы е ко н ц ен тр ац и и и резуль ­таты всех а н а л и зо в по о п р е д ел ен и ю к о н ц е н тр а ц и и и сп ы туем о го в е щ е с тв а в и сп ы ту ем о м сосуде;- ка ч е с тв о воды в и сп ы туем ы х со суд ах, т. е . p H . т е м п е р а ту р а , с о д е р ж а н и е р а с т в о р е н н о го ки сл о ­ро д а. ж е с тко с т ь и ур о в ен ь а м м и а к а :- в о з м е щ е н и е и сп а р и в ш е й с я и сп ы ту ем о й воды, ес л и э то и м е л о место;- ко л и че ств о вы л упи в ш ихся ком аро в (с а м ц о в и с а м о к) н а со суд и в сутки;- ко л и че ств о л и чи н о к н ев ы л упи в ш и хся в ком аро в н а сосуд;- ср ед няя инд и в и дуаль н ая сухая м ас са л и чи но к на сосуд и на стад и ю разв и ти я (при н еоб ход и м о­сти):- п р о ц е н т вы л упл ен и я на п овторность и и сп ы ту ем ая ко н ц е н тр а ц и я (с у м м а р н о е кол и честв о с а м ­цов и с а м о к н асеко м ы х);- с р ед н я я ско ро сть ра зв и ти я пол ность ю в ы л упивш ихся ко м ар о в на п овторность и каж д ую о б р а ­б о тку (о б ъ ед и н ен н о е ко л и че ств о ко м ар о в (с ам ц о в и са м о к));- з н а ч е н и я то кси ч ески х кон ечны х т о ч ек, н а п р и м е р Е С Х (и со о тв етств ую щ и е д о в ер и тел ь н ы е и н т е р ­в ал ы ). N O E C и /и л и L O E C , с т а ти с ти ч е с ки е м ето ды , исп ол ь зо в анн ы е д л я их о п р е д ел ен и я ;- о б с у ж д е н и е результатов, вклю чая л ю б о е в л и я н и е на результаты и сп ы тани я , в о з н и ка ю щ е е зас ч е т о ткл о н е н и й от н а с то я щ е го с тан д а р та. 9
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П рилож ение А(реком ендуем ое)Реком ендации п о культивированию Chironomus riparius1 Личинки Chironomus культивируют в кристаллизационных чашках или более крупных контейнерах. Мелкийкварцевый песок распределяют слоем высотой примерно 5 - 1 0 см над дном контейнера. Было показано, чтокизельгур (например. Merck. Art 81 1 7 ) является подходящим субстратом (достаточным является более тонкийслой в несколько мм). Затем добавляют соответствующую требованиям воду на высоту несколько см. Уровеньводы пополняют при необходимости для восстановления потерь в результате испарения и предупреждения вы­сыхания. Воду заменяют при необходимости. Проводят легкую аэрацию. Сосуды с культивируемыми личинкаминаходятся в подходящей камере, которая будет предупреждать вылет вылупившихся взрослых особей. Камерадолжна быть достаточно большой, чтобы обеспечить роение вылупившихся взрослых особей, иначе не будет про­исходить копуляция (минимальный размер составляет примерно 30 * 30 * 30 см).2 Камеры находятся при комнатной температуре или при постоянной температуре окружающей среды(20 ± 2 ) *С со световым периодом 16 ч свет (интенсивность примерно 1000 лк). 8 ч — темнота. Имеются данные,что влажность воздуха менее 60 % относительной влажности может тормозить репродукцию.Вода для разведения3 Используют любую соответствующую требованиям природную или искусственную воду. Обычно использу­ют колодезную воду, дехлорированную водопроводную воду и искусственные среды (например, среда Elendt «М 4»или «М 7», см. ниже). Перед применением воду аэрируют. При необходимости культуральную воду обновляют, осто­ рожно сливая или откачивая использованную воду из сосудов для культивирования, не нарушая трубочек личинок.Кормление личинок4 Личинок Chironomus кормят хлопьевидным кормом для рыб (Tetra Min®. Telra Phylf8' или кормом для рыбдругой аналогичной марки) из расчета примерно 25 0 мг на сосуд в сутки. Корм вносят в виде сухого размельчен­ного порошка или в виде суспензии в воде: 1.0 г хлопьевидного корма добавляют к 20 мл воды для разведения иперемешивают для получения однородной смеси. Такую суспензию скармливают из расчета 5 мл на сосуд в сутки(перед использованием встряхивают). Личинки более старшего возраста получают большее количество корма.5 Кормление корректируют в зависимости от качества воды. Если культуральная среда становится «мутной»,то количество вносимого корма уменьшают. Добавление корма тщательно контролируют. Слишком малое количе­ство корма будет вызывать переселение личинок по водной колонке, а слишком большое количество корма будетвызывать повышенную микробиологическую активность и снижение концентрации кислорода. Оба фактора могутприводить к пониженным скоростям роста.6 При закладке новых сосудов для культивирования также можно добавлять некоторые зеленые водоросли(например. Scenedesmus subspicatus, Chloreila vulgaris).Кормление вылупившихся взрослых особей 7 Некоторые экспериментаторы предложили использовать ватные палочки, пропитанные насыщенным рас­твором сахарозы, служащие в качестве корма для вылупившихся взрослых особей.Вылуплемие8 При температуре (20 ± 2) "С взрослые особи начинают вылупляться в сосудах с культивируемыми личин­ками примерно через 1 3 -1 5 сут. Самцов легко отличить по перистым усикам.Кладки яиц9 После появления взрослых особей внутри камеры для культивирования все сосуды для культивированияличинок тщательно осматривают три раза в неделю на отложение студенистых кладок яиц. Если они присутствуют,то кладку яиц осторожно удаляют. Ее переносят в небольшую чашку, содержащую пробу воды для культивирова­ ния. Кладку яиц используют для закладки нового сосуда для культивирования (например. 2 - 4 кладки яиц/сосуд)или используют для испытания токсичности.10 Личинки первой стадии развития вылупляются через 2 - 3 сут.Закладка новых культуральных сосудов11 После получения культур закладывают новые сосуды для культивирования личинок каждую неделю илиреже в зависимости от требований испытания, удаляя более старые сосуды после вылупления взрослых комаров.Используя такую систему, можно получить регулярную продукцию взрослых особей при минимальных усилиях.Получение испытуемых растворов «М 4» и «М 7»12 Elendt (1990) описал среду «М 4». Среду «М 7» готовят, как и среду «М 4», за исключением веществ, при­веденных в таблице А .1. концентрации которых в четыре раза ниже в среде «М 7». чем в среде «М 4». В литературеописано приготовление среды «М 7» (Eiendt. персональное сообщение). Испытуемый раствор не следует готовитьв соответствии с Elendt и Bias (1990) для концентраций N a S i0 3 • 5 Н 20 . N a N O j. К Н 2Р 0 4 и К 2Н Р 0 4, которые не под­ходят для приготовления стоковых растворов.10
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Приготовление среды «М7»13Каждый стоковый раствор (I) готовят по отдельности, и объединенный стоковый раствор (II) получаютиз данных стоковых растворов I (см. таблицу А .1). 50 мл объединенного стокового раствора (II) и определенноеколичество каждого стокового раствора макроэлементов, приведенных в таблице А.2. доводят до 1 л деионизиро­ ванной водой с получением среды «М 7». Стоковый раствор витаминов готовят добавлением трех витаминов к д еи ­онизированной воде, как показано в таблице А.З, и 0.1 мл объединенного стокового раствора витаминов добавляютк конечной среде «М 7» непосредственно перед применением (стоковый раствор витаминов хранят замороженнымнебольшими порциями). Среду аэрируют и стабилизируют.Б и б л и о г р а ф и я1 ВВА (1 995). Long-term toxicity test with Chironomvs riparius: Development and validation o f a new test system.Ed. by M. Streloke and H. Kopp. Berlin, 1995.Т а б л и ц а A.1 — Стоковые растворы микроэлементов для среды М 4 и М 7Для получения объединенногостокового раствора (II)Количество,смешивают следующиеКонечная концентрациядоведенноеколичества стоковогов испытуемых растворах.до 1 nСтоповые растворы (I)раствора (1) и доводят до 1 лмгТлдеионизиродеионизированной водой,ванной водой,МПыг М4 М 7 М 4 М7Н3ВО31)571901.00.252.860.715МпС12 - 4 Н20 '>72101.00.250.3610.090U C I 1>61201.00.250.3060.077R bC I1»14201.00.250.0710.018S rC lj - 6 Н20 * 130401.00.250.1520.038N aB r1>3201.00.250.0160.004N a 2M c 0 4 • 2Н 20 1>12601.00.250.0630.016CuCI2 - 2Н 20 ^3351.00.250.0170.004ZnCI22601.01.00.0130.013CoCIa 6H 202001.01.00,0100.010Kl651.01.00.00330.0033N a 2S e 0 343.81.01.00.0220.0022NH4Vo311.51.01.00.000580.000058N a 23 flT A гН ^ О ’ )2»500020 .05.02.50.625F e S 0 4 • 7H 2OVI2)199120.05.01.00.2491> Данные вещества различаются в М4 и М7, как указывалось выше.2> Данные растворы готовят по отдельности, затем сливают вместе и сразу же автоклавируют.Т а б л и ц а А .2 — Стоковые растворы макроэлементов для среды М 4 и М 7Количество стоковых растворовКонечнаяКоличество, доведенноемакроэлемента, добавленное дляконцентрациядо 1 л деионизированнойприготовления среды М4 и М7.в испытуемыхводой, мгмл/лрастворах, мг/лСаС12 - 2 Н202938001.0293.8M g S 0 4 • 2 Н202466000.5123.3KCI580000.15.8N a H C 0 3648001.064.8N a S t0 3 • 9 Н20500000,210.0N a N 0 327400,10.274к н 2р о 414300.10.143к 2н р о 418400.10.184 11
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Т а б л и ц а А.З — Стоковые растворы витаминов для среды М 4 и М7 К о л и ч е с т в о с то ко в ы х р а с т в о ­ К о л и ч е с т в о , д о в е д е н н о е р о в в и та м и н о в , д о б а в л е н н о е К о н е ч н а я ко н ц е н т р а ­ д о 1 л д е и о н и з и р о в а н н о й для п р и го то в л е н и и сред ы ция в и сп ы туе м ы х во д о й , и г М 4 и М 7 , р а с т в о р а х , м г/л м л/лТиамин гидрохлорид7500.10.075Цианокобаламин (В 12)100.10.0010Биотин7.50.10.00075Б и б л и о г р а ф и яElendt В .Р (1990): selenium deficiency in Crustacean. Protoplasma. 154. 2 5 -3 3 . Elendt B.P. & W .-R. Bias (1990): trace nutrient deficiency in Daphnia magna cultured in standard medium for toxicitytesting. Effects on the optimization of culture conditions on life history parameters of D. magna. W ater Research 24(9).1157-1167. 12
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П риложение Б(реком ендуем ое)П р и г о т о в л е н и е и с к у с с т в е н н о г о о с а д к аС остав осадкаСостав искусственного осадка должен быть следующим: П роц е нт от сухой С о с та в л я ю щ и й ко м п о н е н т Х а р а кте р и с т и ка м а с с ы о с а д каТорф сфагнум. pH максимально близко к 5 .5 -6 .0 ; без видимыхТорфрастительных остатков, мелко измельченный (размер частиц s 14 - 5мм) и высушенный на воздухеКварцевый песокРазмер частиц: > 50 % частиц должно быть в диапазоне 5 0 -2 0 0 мкм7 5 -7 6Каолиновая глинаСодержание каолинита 2 30%20Органический углеродДоведенный добавлением торфа и песка(2 ± 0.5)Карбонат кальцияС а С 0 3, измельченный, химически чистый0 .0 5 -0 .1ВодаПроводимость S 10 mkCj'cm3 0 -5 0П риготовлениеТорф высушивают на воздухе и измельчают до мелкого порошка. Готовят суспензию необходимого коли­чества торфяного порошка в деионизированной воде с использованием высокоэффективного устройства для го­могенизация. pH данной суспензии доводят С а С О э д о (5 .5 ± 0 .5 ). Суспензию кондиционируют в течение нем ен ее 2 сут при осторожном перемешивании при (20 ± 2 ) 'С для стабилизации pH и установления стабильногомикробного компонента. Вновь измеряют pH. его значение должно составлять (6.0 ± 0.5). Затем торфяную суспен­ зию перемешивают с другими составляющими компонентами (песком и каолиновой глиной) и деионизированнойводой для получения однородного осадка с содержанием воды в диапазоне от 30 % до 50 % сухой массы осадка.Вновь определяют pH конечной смеси и при необходимости доводят С а С 0 3 до 6 .5 -7 .5 . Отбирают пробы осадкадля определения сухой массы и содержания органического углерода. Затем перед использованием в испытаниитоксичности для хирономид рекомендуют кондиционировать искусственный осадок в течение 7 сут в условиях,аналогичных последующему испытанию.ХранениеСухие компоненты для приготовления искусственного осадка хранят в сухом и прохладном месте при ком­натной температуре. Искусственный (влажный) осадок не следует хранить до его использования в испытании.Осадок используют сразу ж е после 7 сут кондиционирования, когда заканчивается его подготовка.Б и б л и о г р а ф и яO E C D Guidline 20 7. (1 984). Earthworm, Acute toxicity Test. Metier M.. P. Egeler. J. Rombke. H. SchaJInass. R. Nagel and B. Streit. (1 998). Short-term toxicity of lindane,hexachlorobenzene and copper sulfate on tubifrad sludgeworms (oligochaeta) in artificial media. Ecotox. and Environ.Safety. 39 . 1 0 -2 0 .13
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П рилож ение В(реком ендуем ое)Х и м и ч е с к и е х а р а к т е р и с т и к и п р и е м л е м о й в о д ы ,п р е д н а з н а ч е н н о й д л я р а з в е д е н и яВеществоКонцентрацияВешество в виде частиц< 20 МГ/ЛОбщ ее содержание органического углерода< 2 мг/лНеионизированный аммиак< 1 мкг/лЖесткость в виде С аС О э< 4 0 0 мг/л*Остаточный хлор< 10 мкг/лОбщ ее содержание фосфорорганичвских пестицидов< 50 нг/лО бщ ее содержание хлорорганических пестицидов< 50 нг/лплюс полихлорированных бифениловОбщий органический хлор< 2 5 нг/лОднако необходимо отметить, что если предполагается наличие взаимодействия между ионами жестко­сти и испытуемым веществом, то используют воду с более низкой жесткостью (и. таким образом, в такой ситуа­ции не используют среду Elendt М 4).14
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П риложение Г(реком ендуем ое)Р у к о в о д с т в о д л я м о н и т о р и н г а в ы л у п л я е м о с т и л и ч и н о к х и р о н о м и дЛовушки для вылупления помещают в испытуемые сосуды. Эти ловушки необходимы начиная с 20-х сут доконца испытания. Пример ловушки приведен на рисунке Г.1: А — н е й л о н о в а я с е т ка ; Б — п е р е в е р н у та я п л а с ти ко в а я ч а ш ка ; В — б е з л о п а с тн о й с та ка н д л я во зд ей ств ия ; Г — си то вы е о т в е р сти я д л я о б м е н а воды ; Д - вода; Е — о с а д о кРисунок Г. 1 — Ловушки для вылупления личинок хирономид15
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5П рилож ение Д А(справочное)С р а в н е н и е с т р у к т у р ы м е ж д у н а р о д н о г о д о к у м е н т ас о с т р у к т у р о й н а с т о я щ е г о с т а н д а р т аТ а б л и ц а Д А . 1 С т р у кт у р а н а с т о я щ е ю ста нд а рта С т р у кт у р а м е ж д у н а р о д н о ю д о ку м е н та Разделы П одр азде лы П е р е чи сл е н и я Разделы П е р е чи сл е н и яВведение1 . 2 . 3 . 4 . 5. 61122.1Приложение 12.2Приложение 12.3Приложение 12.4Приложение 137485961077.1117.2127.3 а абЬ7.3.1в13с г dДе7.3.2147.4157.5168178.18 . 1.1188 .1.2198.2208.32199.19.1.116
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Продолжение таблицы ДА. 1 С т р у к т у р а н а сто я щ е го с та н д а р та С т р у кт у р а м е ж д у н а р о д н о го д о ку м е н та Р а здел ы П од р а зд е л ы П е р е ч и сл е н и я Р а здел ы П е р е ч и сл е н и я 9 9 .1 .1 .1 — 2 2 — 9 . 1 .1 .2 — 2 3 — 9 . 1 . 2 — 2 4 — 9 . 1 . 3 — — — 9 .1 .3 .1 — 2 5 — 9 . 1 .3 .2 — 2 6 — 9 .1 .4 — — — 9 .1 .4 .1 — 2 7 — 9 . 1 .4 .2 — 2 8 — 9 . 1 . 5 — 2 9 — 9 . 1 . 6 — 3 0 — 9 . 1 . 7 — 31 — 9 . 1 . 8 — — — 9 .1 .8 .1 — 3 2 — 9 . 1 .8 .2 — 3 3 — 9 . 1 . 9 — 3 4 — 9 . 2 — — — 9 .2 .1 — — — 9 . 2 .1 .1 — 3 5 — 9 . 2 . 1 . 2 — 3 6 — 9 . 2 . 2 — 3 7 — 9 . 3 — — — 9 .3 .1 — — — 9 .3 .1 .1 — 3 8 — 9 . 3 .1 .2 - 3 9 — 9 . 3 .1 .3 — 4 0 — 9 . 3 . 2 — 4 1 — 10 10.1 — — — 1 0 .1 .1 — 4 2 — 1 0 .1 .2 — 4 3 — 1 0 .1 .3 — 4 4 — 1 0 .1 .4 — 4 5 — 1 0 .1 .5 — — — 1 0 .1 .5 .1 — 4 6 — 17
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Окончание таблицы ДА. 1Структура настоящею стандартаСтруктура международного документаРазделыПодразделыПеречисленияРазделыПеречисления1010.1.5.24710.1.5.34810.1.5.44910.1.610.1.6.15010.1.6.25110.252Приложение АПриложение 2Приложение БПриложение 3Приложение ВПриложение 4Приложение ГПриложение 5БиблиографияЛитература18
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5Б и б л и о г р а ф и я(1]ВВА (1995). Long-term toxicity test with Chironomus riparius: Development and validation of a new test system.Edited by M. Streloke and H. Kopp. Berlin. 1995(2]Fleming R. et al. (1994). Sediment toxicity test for poorly water-soluble substances. Final Report to them EuropeanCommission. Report No: EC 3738. August 1994. W R c. UK(3]SETAC (1 993). Guidance Document on sediment toxicity tests and bioassys for freshwater and marine environ­ments. From the W OSTA Workshop held in the Netherlands(4]A STM lntemationali'E1706 (2002). Test method for measuring the toxicity of sediment-associated contaminants withfreshwater invertebrates, pp. 1125-1241. In A S TM International 2 0 02 Annual Book of Standards. Volume 11.05.Biological effects and environmental fate; Biotechnology: Pesticides. ASTM International, West Conshohocken. PA(5]Environmental Canada (1997). Test for growth and survival in sediment using larvae of freshwater midges(Chironomus tentans or Chironomus riparius). Biological test method, report SPE 1/R M /32. December 1997(6 ]US-EPA (2000). Methods for measuring the toxicity and bioaccumulation of sediment-associated contaminants withfreshwater invertebrates. Second edition. EPA 600j'R-99.'064. March 2000. Revision to the first edition dated June1994(7]US-EPA>'OPPTS 850.1735. (1996): whole sediment acute toxicity invertebrates(8]US-EPAi'OPPTS 850.1790. (1996): chironomid sediment toxiaty test(9]Milani D.. Day K . E . . McLeay D.J. and Kirby R.S. (1 996). Recent intra- and inter-laboratory studies related to the d e ­ velopment and standardization of environment Canada's biological methods for measuring sediment toxicity usingfreshwater amphipods (Hyaleila azteca) and midge larvae (Chironomus riparius). Technical Report. EnvironmentCanada. National W ater Research Institute. Burlington. Ontario. Canada(10]Sugaya Y. (1997). Intra-specific variations of the susceptibility of insecticides in Chironomus yoshimatsui. Jp. J.Sanit. Zool.. 48 (4):345 -3 5 0(11]Kawai K. (1986). Fundamental studies on Chironomid allergy. I. Culture methods of some Japanese Chironomids(Chironomidae. Diptera). Jp. J. Sanit. Zool.. 3 7 (1):47-57(12]O E C D (2000). Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of difficult substances and mixtures. OECDEnvironment. Health and Safety Publications. Series on Testing and Assessment No. 23(13]Environment Canada (1995). Guidance Document on Measurement of Toxicity Test Precision using control sedi­ ments spiked with a reference toxicant. Report E P S 1/R M /30. September 1995(14]O E C D Test Guideline 207. (1 984). Earthworm. Acute Toxicity Test(15]Suedel B.C. and Rodgers J.H. (1 994). Development of formulated reference sediments for freshwater and estua­ rine sediment testing. Environ. Toxicol. Che.. 13:1163-1175(16]Naylor C. and Rodrigues C. (1995). Development of a test method for Chironomus riparius using a formulatedsediment. Chemosphere. 31: 3 2 9 1 -3 3 0 3(17]Dunnett C.W. (1964). A multiple comparisons procedure for comparing several treatments with a control. J. Amer.Statis. Assoc.. 50:1096-1121(18]Dunnett C.W. (1964). New tables for multiple comparisons with a control. Biometrics. 20: 48 2 -4 9 1(19]Williams D.A. (1971). A test for differences between treatment means when several dose levels are compared witha zero dose control. Biometrics. 27: 103-117(20]Williams D.A. (1 972). The comparison of several dose levels with a zero dose control. Biometrics. 28: 51 0-53 1(21]R ao J.N.K. and Scott A.J. (1992). A simple method for the analysis of clustered binary data. Biometrics. 4 8 :5 7 7 -5 8 5(22]Christensen E.R. 1984. Dose-response functions in aquatic toxicity testing and the Weibull model. W ater Research1 8 .2 1 3 -2 2 1(23]Bruce and Versteeg 1992. A statistical procedure for modeling continuous toxicity data. Environmental Toxicologyand Chemistry. 11:1485-1494(24]Slob W .. 2002. Dose-response modeling of continuous endpoints. Toxicol. Sci.. 6 6 . 2 9 8 -3 1 219
Г О С Т 3 3 6 3 5 — 2 0 1 5У Д К 6 1 :3 8 2 .3 :0 0 6 .3 5 4М К С 1 3 .0 2 0 .0 1Т 5 8Кл ю чев ы е сл ов а: м ед и ц и н с ки е и зд ел и я д ля д и а гн о сти ки in vitro, и н ф о р м а ц и я , п р е д о с та в л я е м а яи зготов и тел ем , м ар ки р о в ка, тер м и н ы , и нстр укц и я по п р и м е н е н и ю 20
Редактор Е.А. КириленкоТехнический редактор В.Н. ПрусаковаКорректор Г.В. ЯковлеваКомпьютерная верстка Ю.В. Поповой С д а н о в н а б о р 0 9 .1 1 .2 0 1 5 . П о д п и с а н о в п е ч а т ь 2 5 .0 2 2 0 1 6 Ф ор ы а т 6 0 » 8 4 1 Г а р н и ту р а А р и а л . У ел. п е ч . л 3 .2 6 . У ч.-и а д . л . 2 .9 0 . Т и р а ж 32 э м . Зак. 663. H a6pai«o в ИД -Ю р и с п р у д е н ц и я » . 115419. М о с кв а , ул. О р д ж о н и ки д зе . 11 w w w . ju ris ir d a t. ru y -b o o X © m a iU u И зд а н о и о т п е ч а та н о во Ф Г У П - С Т А Н Д А Р Т И Н Ф О Р М -. 1 2 3 9 9 5 М о сква . Г р а н а тн ы й п е р ., 4w w w .g o s lin fo .ru in fo © g o s 1in fo .ruГОСТ 33635-2015

Похожие документы